流式 8 色实验方案 - 活化 T 细胞因子检测 概述.pdfVIP

BDBD CHINA BDBD Unit 02B, 03, 05, 28/F, Tower 3, China Central Place 北京市朝阳区建国路 77 号， No.77 Jianguo Road, Chaoyang District, 华贸中心 3 号写字楼 28 层 02B03 ，05 室 Beijing, 100025 Tel: 86-10-5813 9000 Fax: 86-10-5813 9191 流式流式 8 色实验方案色实验方案 - 活化活化 T 细胞因子检测细胞因子检测 流式流式 色实验方案色实验方案 活化活化 细胞因子检测细胞因子检测 概述概述 概述概述 细胞因子是调节淋巴细胞免疫反应的可溶性蛋白，同时可参与各种免疫细胞的生长、分化 功能发挥。细胞因子既是细胞活化的反应因子也是细胞的调节因子，人们根据合成的细胞因 子不同将T 细胞分为各种亚群，如Th1(IL-2，IFN-g) ，Th2(IL-4，IL-5，IL-10)。 目前，加入莫能霉素或BFA 阻断细胞因子的外排，使细胞因子在胞内聚集，再采用合适的 固定剂、透膜剂，我们可以检测刺激细胞内部的细胞因子、核因子。结合表面染色分群，该 方法可以检测一种细胞多种细胞因子的表达情况，也可以检测不同细胞亚群同一种细胞因子 的表达情况。这对于研究特殊刺激剂的免疫效果有独特的优势。 设备设备 设设备备 1. 普通低速离心机(实验要求为300g~600g，可调转速调时间，能离心12x75mm的5ml 试管)，最好为水平转子； 2. 12x75mm 的5ml 流式管； 3. 固定或可调节的加样器及相应加样头若干：2ul， 20ul ，100ul，200ul，1ml； 4. 旋涡混匀器； 5. 300 目过滤尼龙网； 6. 可放置12x75mm的5ml试管的试管架2 －3个； 7. PBS 溶液和蒸馏水：0.22µm滤膜过滤 8. BD FACS流式细胞仪，配置4B-2R-2NV BDBD CHINA BDBD Unit 02B, 03, 05, 28/F, Tower 3, China Central Place 北京市朝阳区建国路 77 号， No.77 Jianguo Road, Chaoyang District, 华贸中心 3 号写字楼 28 层 02B03 ，05 室 Beijing, 100025 Tel: 86-10-5813 9000 Fax: 86-10-5813 9191 BD Pharmingen 流式抗体流式抗体 流式抗体流式抗体 Marker Fluorochrome Surface/ Intracellular Cat.No. Isotype (S/I) CD3 APC-H7 S 560275 CD25 PE-Cy7 S 557741 557872 CD8 PerCP