刺激响应双硒交联聚乙烯亚胺基因微载体.pdfVIP

Vo1．35 高 等 学校 化 学 学报 No．4 2014年4月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERS1TIES 881～887 doi：10．7503／cjc 刺激响应双硒交联聚乙烯亚胺基因微载体 孔韵娜 ，李文宇 ，杜建委 ，汤建国 ，胡巧玲 ，王幽香 (1．教育部高分子合成与功能构造重点实验室 ，浙江大学高分子科学与工程学系， 2．浙江大学医学院附属邵逸夫医院，杭州310027) 摘要 以丙酸二硒醚为交联剂 ，通过调节交联剂的用量及反应时间，制备 了4种双硒交联聚乙烯亚胺 (PEISeSe)，研究了其对脱氧核糖核酸(DNA)缔合能力、质子缓冲能力和转染效率 的影响．结果表明，随着 交联程度的增大，质子缓冲能力降低．PEISeSe能有效诱导DNA的缔合，当聚合物与DNA的质量 比18时， PEISeSe／DNA组装体可形成 150nm的粒子．在模拟细胞内的还原性环境下，双硒键能有效断裂，显示出很 好的响应特性．将氯喹与PEISeSe／DNA组装体同时加入到 HEK293T细胞中，氯喹的存在有利于PEISeSe／ DNA组装体逃离溶酶体．在细胞内高浓度还原型谷胱甘肽的作用下，PEISeSe交联聚合物可被降解为低分子 量的PEI片段，有利于释放出DNA并进攻细胞核，提高转染率并降低毒性． 关键词 双硒交联 ；聚乙烯亚胺；刺激响应；非病毒基因载体 中图分类号 O631．3；Q782 文献标志码 A 基因治疗是将外源正常遗传物质[脱氧核糖核酸 (DNA)或核糖核酸 (RNA)]导人靶细胞，纠正或 补偿因基因缺陷或异常引起的疾病，达到治疗 目的 J．因此，研究具有低毒性、低免疫原反应、易制 备等优点的非病毒基因载体成为当今的热点 ． 聚乙烯亚胺(PEI)具有 “质子海绵效应”，是最有效的基因载体之一，已成为设计新型聚阳离子基 因载体的标准 ，’]．分子量高于2．5xl0的PEI具有较高的基因转染率，但其在体 内不能生物降解，具 有较高的细胞毒性；相比之下，分子量低于 1．8x10的PEI虽然细胞毒性较低，但很难实现基因的高效 转染 J．同时，非病毒基因载体设计中的一个关键问题是如何解决DNA和基因载体在传递过程中的 稳定缔合和在细胞内的解离并高效释放表达这一对矛盾 ’mj．由于细胞 内外还原型谷胱甘肽的含量 (在细胞内：3—10mmol／L；在细胞外：10Ixmol／L)存在巨大差异，因此大量研究是通过制备含双硫键 (一s～s一)的刺激响应非病毒基因载体，有效实现DNA在细胞内的解离释放及高效转染…’．双硒 键(一se—se一)与双硫键相似，在还原剂的作用下发生断裂，但双硒键比双硫键更为敏感，更容易断 裂 J．Zhang等 ¨合成了含双硒键的嵌段聚合物PEG—PUSeSe—PEG，并制备出具有还原响应性的载 药胶束，结果表明，加入谷胱甘肽后，胶束能缓慢释放出药物．Gu等 分别通过含双硫键、双硒键和 单硒键的交联剂交联低分子量PEI。。，使阳离子交联聚合物能有效缔合 DNA，并有效转染．交联密度 与交联聚合物的分子量和伯胺基数量密切相关，因此，本文从 PEI。。出发，以丙酸二硒醚为交联剂， 通过调节交联剂用量及反应时间，制备了4种双硒交联聚乙烯亚胺(PEISeSe)，研究不同交联程度对 DNA缔合能力、质子缓冲能力和转染效率的影响． 1 实验部分 1．1 试剂与仪器 支化聚乙烯亚胺 (PEI。。，分子量为 1．8×10，纯度 99％)、硒粉 (纯度99．9％)、3．氯丙酸 (纯度 98％)、硼氢化钠 (纯度98％)、Ⅳ一羟基琥珀酰亚胺(NHS，纯度98％)和二环己基碳二亚胺 (DCC，纯度 收稿 日期 ：2013-O9-22． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号51273177)和浙江省科技厅优先主题重点社会发展项 目(批准号：2010c3025-2) 资助 联系人简介：王幽香，女，博士，副教授，主要从事生物医用高分子材料研究．E—mail：yx_wa