小鼠Bax的基因克隆及其原核表达.pdfVIP

·662 · 检验医学与临床 2011年 3月第8卷第 6期 蜊 !， ：!：：!： · 论 著 · 小鼠Bax的基 因克隆及其原核表达 唐晓莹 ，捕雄勇。(1．江苏省昆山市第三人民医院检验科 215316；2．江苏省昆山市第一人民医院 、 检验科 215316) 【摘要】 目的 克隆小鼠Bax基 因全长编码 区，并原核表达小鼠Bax基 因全长序列 ，为从转录水平探讨 Bax基 因与肿瘤的关系奠定基础。方法 取 小鼠骨髓 细胞 ，采用逆转 录一聚合酶链反应 (RT—PCR)从 细胞 中获得 Bax基 因， 构建重组表达质粒 pet28a／Bax；酶切鉴定挑选 阳性重组质粒转化大肠埃希茵ROS，测序鉴定后经 IPTG25℃诱导6 h，SDS电泳判断以包涵体形式存在的带有 His标签的融合蛋白，Westernblot鉴定。结果 扩增获得 的Bax 基 因Cbs区全长579bp，编码 192个氨基酸残基 ，与 GenBank中发表 的序列完全一致 。成功构建 了原核表达栽体 pet28a／Bax，并在工程茵R0s中获得大量表达。结论 获得 了小鼠Bax基 因，并成功原核表达和制备 出小鼠Bax 融合蛋白，为进一步研 究其生物学功能奠定 了基础，并为寻找多种肿瘤性疾病 的有效治疗途径提供新思路。 【关键词】 Bax基 因； DNA； 克隆 ； 聚合酶链反应 ； 原核表达 DOI：10．3969／j．issn．1672—9455．2011．06．009 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672—9455(2011)06—0662—02 CloningandexpressionofmouseBaxgene TANGXiao—ying ．PUXiong—yong (1．DepartmentofClinicalLabora— tory，KunshanThirdPeoplesHospital，Kunshan，Jiangsu215316，China；2．DepartmentofClinicalLaboratory， KunshanFirstHospital，Kunshan，Jiangsu215316，China) [Abstract] Objective TocloneandexpressmouseBaxinordertostudytherelationbetweenBaxtumors． M ethods TheBaxgenewasamplifiedfrom mousemyeloidceilsbyRT PCR．Baxgenewasconstructedintopet28a vectorandexpressedinE．coliROS．ThefusionproteinwastestedbyW esternblot．Results ThegeneofBaxhadthe length of579bpwith acompleteopenreadingfame．whichencodedaproductof192aminoacidandshared 100 ho— mologywiththesequenceofmRNAformouseBaxinGeneBank．Theprokaryoticexpressionplasmidpet28a／Baxwas constructedsuccessfullyandtheBaxproteinwasgained．Conclusion MouseBaxgeneisclonedandexpressedinE． colisystem successfully，whichbringsafoundationforfurtherresearch on itsbiologicalfunction． [Keywords] Baxgene； DNA； cloning； PCR； proteinexpression 1993年 ，0ltvai等 发 现了一种能与 Bcl2共 沉淀 的蛋 白 仿 ，盖紧 EP管用力振摇 15s，室温放置 10min；4℃ ，12000× 质 ，命名为 Bax(Bcl一2associatedXprotein)，属于 Bcl一2家族 ， g离心