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中国乳品工业
rpgy@
婴儿配方粉中阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立
卢雁 王淼 房玉国 王旻 王宇 赵长利
, , , , ,
国家乳制品质量监督检验中心 哈尔滨
( )
, 150086
摘 要 建立奶粉中阪崎肠杆菌荧光定量 检测方法 为准确 快速地定量检测阪崎肠杆菌奠定基础 根据阪崎肠杆菌 基
: PCR , 、 。 16SrDNA
因序列 设计特异引物和荧光标记探针并合成 用 扩增产物克隆的重组质粒作为阳性对照 经紫外分光光度计测定重组质粒浓度
, , PCR , ,
2
梯度稀释后作为标准品绘制标准曲线 其 值与模板浓度有良好的线形关系 相关系数 值为 可以用于阪崎肠杆菌浓度鉴定
, , : , 。
Ct R 0.997
用该方法检测阪崎肠杆菌样品 份 阳性 份 阳性检出率为 与常规检测方法结果完全符合 本文建立的检测阪崎肠杆菌的荧光定
21 , 4 , 19%, 。
量 方法 较常规技术更为简便 快速 有很好的应用前景和研究价值
PCR , 、 , 。
关键词 阪崎肠杆菌 荧光定量 阈值
: ; ;
中图分类号: 文献标识码: 文章编号: ( )
TS252.7 A 1001-2230200807-0047-03
FluorescentquantitativePCRmethodfordetectingEnterobactersakazakiiininfant
powder
LUYan,WANGMiao,FANGYu-guo,WANGMin,WANGYu,ZHAOChang-li
(NationalDairyTestingCenter,Harbin150086,China)
:
AbstractToestablishfluorescentquantitativePCRmethodfordetectingEnterobactersakazakii(E.sakazakii)inpowder.Accordingtothespe-
cificsequenceofE.sakazakii16srDNAgenes,theprimersandthefluorescentprobeweredesignedandsynthesized.Thepositiverecombinant
plasmidwouldbeusedasstandardquantitativetemplatetomakethestandardcurveforsampledetection.Thestandardcurveindicatedthelin-
2
earrelationshipbetweenCtandtemplateconcentration,R=0.997.Thedetectionof21casesoftheinfantpowder,isolatedofE.s
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