海带配子体叶绿素ac结合蛋白基因lhcf6序列特征与系统发生分析.pdfVIP

海带配子体叶绿素a/c 结合蛋白基因lhcf6 的序列特征 与系统发生分析1 毕燕会，周志刚 农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室，上海水产大学生命科学与技术学院， 上海 （200090 ） E-mail ：zgzhou@ 摘 要：根据糖海带（Laminaria saccharina ）叶绿素a/c 结合蛋白基因lhcf6 的cDNA 序列 设计引物，通过 PCR 方法获得海带（L . japonica ）配子体lhcf6 基因的 cDNA 全长序列 （GenBank 登录号：DQ250739 ）。其开放阅读框（open reading frame ，ORF ）与糖海带lhcf6 编码序列的相似性高达99% ，而它们非翻译区（untranslated region ，UTR ）序列的相似性只 有 94%。基于海带配子体lhcf6 基因序列推测，其 ORF 编码一含218 个氨基酸的前体蛋白 LHCF6 ，它氨基端的40 个氨基酸组成跨质体内质网和叶绿体膜的信号肽，跨膜酶切后变为 含 178 个氨基酸的成熟蛋白，它的分子量为19.3 kD，等电点为4.88 。预测的成熟蛋白LHCF6 高级结构存在2 个保守性的β折叠和3 个跨类囊体膜的α螺旋区。根据海带配子体LHCF6 成熟蛋白以及GenBank 中12 个同源蛋白质的氨基酸序列所构建的Neighbor-joining 分子进 化树，显示藻类在光捕获蛋白氨基酸序列水平上具有向蓝藻与红藻、杂色藻类、裸藻与绿藻 等三个方向的演化途径，裸藻和绿藻与高等植物的亲缘关系更近。 关键词：海带，叶绿素a/c 结合蛋白，lhcf6 ，系统演化 0. 引言 光捕获蛋白是一类镶嵌于类囊体膜上、结合天线或辅助色素、为光合反应中心捕获与传 递光能的蛋白。在糖海带（Laminaria saccharina ）中，叶绿素a/c 结合的光捕获蛋白（LHCF ） 是由7 个成员所构成的蛋白家族，以形成光捕获蛋白复合体[1] 。光捕获蛋白的表达调控有利 于藻类适应外界光条件的变化。在正常光合作用光照条件下，藻类光捕获蛋白起着结合色素 并将色素捕获的光能分配传递至光反应中心以进行光合作用[2] ；在光照强度超过光合作用所 需的最大光通量时，藻类细胞可通过调整捕光蛋白基因表达量，降低类囊体膜结合的色素并 [3] 减少光能的传递，以对叶绿体进行光保护，防止出现不可修复性损伤 ；在光照过弱及营养 不足等胁迫条件下，增加类囊体膜上光合作用复合体中一些捕光蛋白的量，更有效地参与光 ， ， 能的捕获、传递与贮藏以及其他未知功能以适应变化的环境[4 5 6] 。 De Martino 等[1]发现 lhcf 中的一些基因在糖海带孢子体或配子体特定发育阶段优先转 录，推测该类基因表达的调控元件除调控光通量外还可能执行着其他的功能。史西志等[7] 发现海带（L . japonica ）配子体在营养生长阶段，lhcf6 基因在雄配子体中的表达量明显高于 雌配子体。暗示该家族基因在某种调控机制下，可能参与海带配子的形成等过程。要想探讨 这个问题，首先必须获得海带配子体的lhcf6 基因。鉴于褐藻中lhcf 基因家族大多只有一个 [1] 内含子 ，我们直接通过海带配子体基因组 DNA ，根据糖海带 lhcf6 基因的 cDNA 序列 （GenBank 登录号：AF226862 ）设计引物并进行PCR 扩增，测序后与已知2 个克隆的序列 [7]拼接，获得海带lhcf6 基因的全长cDNA 序列。然后借助生物信息学相关软件预测其编码 蛋白序列、性质、结构等。 真核生物所有天线色素结合蛋白可能来自一个共同的蛋白祖先[8]，因此有理由认为基于 1本课题得到国家自然科学基金委员会30