TNF-α在IFN-γ诱导的感染牛分枝杆菌的THP-1细胞凋亡过程中的作用及相关信号通路分析.pdfVIP

畜牧兽 医学报 2010，41(5)：581—586 ActaVeterinariaetZootechnica Sinica TNF一在 IFN一丫诱导的感染牛分枝杆菌的THP一1 细胞凋亡过程 中的作用及相关信号通路分析 张交儿 ，王志远 ，黄 瑛 ，王 洋 ，尹晓敏 ，周 向梅 ，赵德 明 (1．中国农业大学 国家动物海绵状脑病实验室 ，北京 100193；2．山东畜牧兽医职业学 院，潍坊 261060) 摘 要 ：为研究 IFN一7对感染牛分枝杆菌的THP一1细胞的促凋亡作用 ，及 TNF_a在此细胞凋亡过程 中的作用和 相关信号分子的变化 ，使用浓度为 15ng ·mL。的 IFN-7作用于不同剂量牛分枝杆菌北京株 (MOIl0：1，20：1)感 染的THP一1细胞 ，在感染后 12、24、36、48和 72h，使用流式细胞仪测定细胞凋亡百分 比。结果显示 ，IFN一7诱导了 M．boris北京株感染的细胞凋亡 ，并且凋亡呈时间相关性 。随着细胞凋亡百分 比的增加 ，牛分枝杆菌的CFU 降 低。在 IFN一7和 M．boris北京株 (MOIl0：1)处理的巨噬细胞 内加入抗 TNF_a单克隆抗体 ，感染后 36h，细胞凋 亡百分比测定结果显示 ，加入抗 TNF—a单抗抑制 了 IFN7诱导的M。boris感染的 THP一1细胞 的凋亡 ，与对照组 相 比，差异显著(P0．05)；用分光光度计检测表 明Caspase一3和 Caspase-8的激活是 TNF—d依赖性 的。在 IFN一7 和M．boris北京株 (MOI10：1)作用的 THP1细胞 内分别加入 JNK inhibitorI或 NEMO-BindingDomainBinding Peptide，或同时加入 2种抑制剂 ，36h后测定细胞凋亡情况 ，与对照组相 比，加入抑制剂后 ，细胞凋亡无显著差异(P 0．05)，说 明在本试验 中，JNK通路和 NF—KB凋亡通路未被激活 。本研究初步阐明了TNF-a在 IFN一 诱导的感 染牛分枝杆菌的细胞凋亡过程 中的作用及相关信号通路 。 关键词 ：牛分枝杆菌；IFN一7；THP一1细胞 ；细胞凋亡 ；TNF—a；信号通路 中图分类号：$852．618 文献标识码：A 文章编号：0366-6964(2O1o)05—0581一O6 StudyofTNF-aM ediatedSignalPathwayInvolved inIFN-7一Promoted ApoptosisofTHP-1CellsduringInfectionwithM ycobacterium boris ZHANGJiao—er ，WANG Zhi—yuan ，HUANG Ying ，WANG Yang ，YIN Xiao—min ， ZHOU Xiang—mei．ZHAO De—ming (1．NationalAnimalBSELaboratory China AgriculturalUniversity，BeUing100193，China ； 2．ShandongVocationalAnimalScienceandVeterinaryCollege，Weifang261060，China) Abstract：ThisexperimentwasconductedtostudythepromotingeffectofIFN一丫on apoptosisof THP-1cellsinfected with M ycobacterium bovis，and the roleofTNF一口and itsrelevantsignal moleculesduringcellapoptosis．IFN一7 (15ng ·mL )wasaddedtoPMA differentiatedTHP一1 cellsinfectedwithM ．boris—BJatdifferentdoseofM 0I(10：1，20 ：1)，thepercentageofapop— toticcellswereanalyzedbyflow cytometryat12，24，36，48and72hpos