蚓激酶活性测定方法.docVIP

蚓激酶 Yinjimei Lumbrokinase 本品系人工养殖的赤子爱胜蚓（Eisenia Foetida Savigny）中提取制备的一组蛋白水解酶。按干燥品计算，每1mg效价应不得少于12000单位。每1mg蛋白中蚓激酶比活力不得少于20000单位。 【性状】 本品为淡黄色粉末；味腥，有引湿性。 【鉴别】 （1）取本品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A）测定，在278nm的波长处有最大吸收。 （2）取本品适量，加0.9％氯化钠溶液制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液；用6号针头取动物血1滴于试管底部，30分钟后，加供试品溶液1ml置试管中，轻轻摇动，血凝块应在60分钟内溶解。以0.9％氯化钠溶液1ml为空白，同法操作，血凝块应不溶解。 【检查】 酸碱度 取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，依法测定（中国药典2000年版二部附录VI H），pH值应为6.0～8.0。 溶液的澄清度与颜色 取本品适量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，溶液应澄清；如显色，与黄色号标准比色液（中国药典2000年版二部附录IX A第一法）比较，不得更深。 干燥失重 取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得超过.0％（中国药典2000年版二部附录VIII L）。 【比活力测定】 效价测定 （1）试剂 0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.8） 取磷酸氢二钠3.58g，加水使溶解并稀释至1000ml为A液；取磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）0.78g，加水使溶解并稀释至500ml为B液；将A、B两液混合至pH值为7.8。 工作溶液 取0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.8）与0.9％氯化钠溶液（1:17）混合。 1.5%琼脂糖溶液 取琼脂糖1.5g，加工作溶液100ml加热溶解。 纤维蛋白原溶液 取纤维蛋白原适量，加工作溶液制成每1ml中含1.5mg的可凝蛋白溶液。 凝血酶溶液 取凝血酶，加0.9％氯化钠溶液制成每1ml中含1BP单位的溶液。 （2）标准品溶液的制备 取蚓激酶标准品，用0.9％氯化钠溶液制成浓度分别为每1ml中含100008000，6000，4000，2000蚓激酶单位的溶液。 （3）供试品溶液的制备 取本品适量，加0.9％氯化钠溶液使溶解并稀释成标准曲线范围内的浓度。 （4）测定法 取纤维蛋白原溶液39ml，置烧杯中，边搅拌边加入55℃琼脂糖溶液39ml、凝血酶溶液3.0ml，立即混匀，快速倒入直径14cm塑料培养皿中，室温水平放置1小时，打孔。精密量取不同浓度的蚓激酶标准品溶液及供试品溶液各10(l，分别点在同一平皿中，加盖，置37℃恒温箱中反应18小时。取出后用卡尺测量溶圈垂直两直径，以蚓激酶标准品单位数的对数为 横坐标，垂直两直径乘积的对数为纵坐标，计算回归方程，将供试品垂直两直径乘积的对数代入回归方程，计算供试品效价单位数。标准品与供试品应各做两点，以平均值计算。 蛋白含量 取本品约20mg，精密称定，照氮测定法（中国药典2000年版二部附录VII D第二法）测定，将结果乘以6.25，即为供试品中蛋白含量，并计算每1mg供试品中的蛋白毫克数。 国家食品药品监督管理局 发布 国家药典委员会 审定 比活力 按下式计算比活力： 每1mg供试品中效价单位数 比活力 ＝ 每1mg供试品中蛋白的毫克数【类别】 蛋白水解酶。 【贮藏】 密封保存。 【制剂】 蚓激酶肠溶胶囊