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微生物鉴定中的生理生化试验 摘要：试验包括对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的大分子物质的水解试验，大肠杆菌、 产气肠杆菌的糖发酵试验以及大肠杆菌和普通变形杆菌的IMViC试验，证明了不同菌种在生理生化方面的多样性。 关键词：生理生化 水解实验 糖发酵 IMiC实验 前言：活细胞代谢过程主要是酶促反应，有胞内酶和胞外酶之分。各种微生物在代谢类型上表现出很大差异，如对大分子物质的分解能力和代谢产物的不同，反应出它们具有不同的酶系和生理特性，可以用来作为菌种鉴定和分类的内容。 某些细菌能够产生分解淀粉的酶，通过碘液对淀粉的显色反应，这样就可以通过对菌落周围是否有透明圈来鉴别出产淀粉酶的菌种；类似的，脂肪水解后产生脂肪酸后可以改变培养基的pH值，使pH值降低，加入培养基中性红 指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，则说明细胞外存在脂肪酶；在进行糖发酵实验中，当发酵产酸时，指示剂会改变颜色，是否产气可以通过倒置的徳汉氏小管来观察，通过这样来鉴定不同细菌在分解糖类物质时能力差异。 有些微生物具有分解分解色氨酸产生吲哚的能力，吲哚实验是通过吲哚与二甲基氨基苯甲酸的反应来检测吲哚的产生。甲基红实是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，通过对pH的区别来区别不同菌种。 1材料和方法 1.1 材料 1.1.1菌种 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 普通变形杆菌 产气肠杆菌 铜绿假单胞菌 1.1.2 溶液、试剂和仪器 卢戈氏碘液 乙醚 吲哚试剂 甲基红试剂 无菌平板 无菌试管 接种环 试管架 滴瓶 滴管 无菌平板、无菌试管、接种环、试管架、滴瓶、滴管 表1相关培养基及其配制 培养基 淀粉培养基 油脂培养基 蛋白胨水培养基 糖发酵培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基 配方 蛋白胨2g，NaCl1g，1g牛肉膏，0.4g可溶性淀粉，蒸馏水200ml，琼脂3~4g 蛋白胨2g，牛肉膏1g ，NaCl1g香油或花生油2g，1.6%的中性红0.2ml，蒸馏水200ml，琼脂3~4g 蛋白胨2g，NaCl1g，蒸馏水200ml，pH7.6 蛋白胨水培养基1000ml，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1~2ml，pH7.6，另配制葡萄糖（或乳糖）各10ml 蛋白胨5g，葡萄糖5g，k2HPO42g蒸馏水1000ml ，pH7.0~7.2 制备 121℃灭菌20min 121℃灭菌20min 121℃灭菌20min 见下面方法1.2.3.1 分装试管121℃灭菌20min 1.2.1.1固体淀粉培养基融化后冷却至50℃左右，无菌制作平板。平板底部划分为四部分。 1.2.1.2将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在不同的部分划线接种，在平板的反面分别写上菌名。将平板倒置在37℃温箱中培养48h。 1.2.1.3观察各种细菌的生长情况，打开平板的盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板。观察。 1.2.2油脂水解实验 1.2.2.1将熔化的固体油脂培养基冷却至50 ℃左右时，充分振荡，使油脂均匀分布，无菌操作倒平板，待凝。用记号笔在平板底部划成四部分 1.2.2.2将枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌分别用无菌操作划十字接种于平板的相对应的部分的中心，分别标上菌名。将平板倒置，于37 ℃温箱中培养48h。 1.2.2.3取出平板，观察菌苔颜色。 1.2.3糖酵解实验 1.2.3.1制作糖发酵培养基 1.2.3.1.1将上述含指示剂的蛋白胨水培养基分装于试管中，在每个试管中放一个倒置的德汉式小管，使充满培养液。 1.2.3.1.2将已分装好的蛋白胨水和20%的各种溶液分别灭菌，蛋白胨水121℃灭菌20min；糖溶液112℃灭菌30min。 1.2.3.1.3灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%的无菌糖溶液0.5ml。 1.2.3.2用记号笔在各试管外壁中分别标明发酵培养基的名称和所接菌种的名称。 1.2.3.3取葡萄糖培养基试管5支，两只接入大肠杆菌、两只普通变形菌，第五只对照。另取乳糖发酵培养基5支，做同样的处理。37℃培养48h后观察。 1.2.4吲哚实验 1.2.4.1将大肠杆菌和产气肠杆菌分别接入2支蛋白胨水培养基，置于37℃培养48h。 1.2.4.2向培养基中加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性。 1.2.5甲基红试验 1.2.5.1将大肠杆菌和产气肠杆菌分别接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基，置于37℃培养48h。 1.2.5.2于葡糖糖蛋白胨水培养基的培养物内加甲基红试剂2滴。培养基变黄为阴性，红为阳性。 2结果与分析 2.1 实验结果 2.1.1结果记录 表2大分子水解实验结果记录 大肠杆菌 枯