细胞重组与克隆技术.ppt

细胞重组与克隆技术 细胞拆合：把完整细胞的细胞核与细胞质用特殊的方法分离开来，或把细胞核从细胞质中吸取出来，或用紫外线等把细胞中的核杀死，然后再把同种或异种的细胞核和细胞质重新组合起来，培育新的细胞或新的生物个体。 细胞重组：细胞融合技术与细胞核质分离技术结合，在融合介质作用下，使胞质体与完整细胞合并，重新构成胞质杂种细胞的过程。 8.1细胞重组 8.11胞质杂种 8.12微细胞核移植 8.13核移植 8.14细胞重建 8.11胞质杂种 胞质体（cytoplast）：除去细胞核后由膜包裹的无核细胞，由细胞松弛素B处理后，经离心得到。 1972年，Prescott借助细胞松弛素的和高速离心得到 核体（karyoplast）：由胞质体分离出来的核，带有少量胞质并围有质膜的结构。 胞质杂种细胞：将胞质体和另一完整细胞融合得到的细胞。 杂种细胞：核体与完整细胞融合。 重组细胞：核体与另一种细胞的胞质体融合。 利用细胞融合技术得到的重组细胞 1、2、3亲本细胞 4、6核体 5、7胞质体 8、9杂种细胞 10重组细胞 11胞质杂种细胞 ⅠPEG介导 ⅡHAT培养基筛选 鉴别与意义 利用双重标记法鉴别杂种细胞的真伪，可以采用两个具有不同缺陷型的细胞作标志，或用3H－胸腺嘧啶核苷作核标记，并使其吞入不同颗粒的乳胶作为胞质标志，或者用3H－亮氨酸等标记氨基酸作为胞质标记，也可用红绿荧光的聚乙烯颗粒标记重组细胞。 意义：胞质杂种细胞是不同种系之间的一种真正的新型细胞，在适宜的条件下能成功的生存下去，它在物种的品种改良、医学及农业的各个方面将产生重大的影响。 8.12微细胞核移植 微细胞：只有一条或几条染色体和一薄层细胞质，外面包裹一层完整的细胞质膜的核质体。利用秋水仙素先将细胞阻断在染色体中期，然后培养，再用细胞松弛素B处理得到。 以微细胞作供体，通过与遗传性完整的受体细胞融合，可以将微细胞内所含有的几条染色体转移到受体细胞中去。 微细胞杂种细胞的制作过程 8.13细胞核移植 核移植起始于用微吸管对阿米巴等原生动物进行的核操作。 在1952年，美国人罗伯特·布里格斯和T·J·金，首先利用两栖类卵细胞建立细胞核移植技术。由于两栖类的蛙卵数量较多，体积较大，容易获得，操作方便。 1958—1962年，英国剑桥大学的约翰·格登教授和麦金尼尔利用瓜蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲瓜蟾。 非洲爪蟾制作 我国的研究 中国的细胞核移植技术工作，开始于本世纪50年代，主要是在两栖类和鱼类上进行的， 从1961年开始，童第周等以金鱼和鳑鲏鱼为材料，进行鱼类不同亚科间的细胞核移植获得成功，用以研究杂交细胞核于纯种细胞核在发育功能上的差异，以及细胞质对细胞核的影响。 1978年，将黑斑蛙成体红细胞的细胞核移入去核的未受精卵内，卵子最后发育成正常的蝌蚪。 哺乳动物核移植 ，哺乳类的移核实验必须在一种很精密的仪器——显微操作仪下才能进行。 最早用来做移核试验的哺乳动物是小鼠。 1977年，美国缅因州巴尔港的杰克逊实验室用“亚无性繁殖”的方式，培育出7只单亲小鼠。 1981年1月，美国《科学》杂志封面刊登3只小鼠的照片，他们将囊胚内细胞团细胞的核移入去核的受精卵中，经培养移核卵发育至囊胚期，再将胚胎植入同步孕鼠的子宫内，最后产下两雌一雄仔鼠，并发育成了可育的个体。 核移植小鼠 克隆 克隆（clone）是指遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体，也指通过克隆方式生产克隆群体的过程或手段。 从理论上讲，任何一个具有核的细胞都含有其生物体基因组的全部基因，因此都可以克隆。 多莉的诞生 克隆步骤上 克隆步骤下 克隆动物成功与否的关键性问题 首先是核移植过程中要分离得到供体细胞和作为受体细胞的卵细胞 。 其次要取处在适当发育阶段及细胞周期的受体和供体细胞，受体细胞和供体细胞处于细胞周期中的同一时期 ，核移植成功的几率最大。 受体细胞在细胞周期中所处的时间对转核实验成功与否的影响要大于供体细胞所处的时间的影响，一般取G2期进行核移植的效果都较好。 另外，细胞诱导分裂成熟的因子（MPF）的活性有关。 克隆的伦理 克隆羊的诞生也从理论上，表明了人类可以自身进行无性繁殖的可能性。如果克隆技术应用于人类，必将对人类社会的基本组织单位——家庭产生很大的冲击，同时也一定会直接威胁人类社会现有的法律、伦理和道德。多个国家政府已经明确宣布政府科研基金决不会支持任何将克隆技术应用于人类的研究。 8.14细胞重建 细胞重建的概念是我国贝时璋院士提出的。 定义：体内已经存在的某种物质，可以由细胞质，甚至细胞外的某种基质为基地，通过自组织、自装配过程，一步步地形成完整的细胞。 早在20世纪30年代，贝教