第三部分酶学相关实验技术.docVIP

温度、pH等对酶促反应速度的影响 一.实验目的 了解温度、pH、激动剂和抑制剂对酶促反应的影响。 二.实验原理 温度与酶促反应速度关系密切。温度降低时，酶促反应速度降低以至完全停止；随着温度升高，反应速度逐渐加快。在某一温度时反应速度达到最大值，此温度称酶作用的最适温度。温度继续升高，反应速度反而下降。人体内大多数酶的最适温度在37℃左右。 PH值影响酶促反应速度，是由于酶本身是蛋白质。PH不仅影响酶蛋白分子某些基团的解离，也影响底物的解离程度，从而影响酶与底物的结合。当酶促反应速度达到最大值时的溶液pH值，称为该酶的最适pH。不同的酶最适pH值不尽相同，人体多数酶的最适pH值在7.0左右。例如唾液淀粉酶的最适pH值为6.8。 凡是能够提高酶活性，加快酶促反应速度的物质都称为酶的激动剂。例如Cl-是唾液淀粉酶的激动剂。 凡是能够降低酶的活性，使酶促反应速度减慢，又不使酶变性的物质称为酶的抑制剂。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂。 三.试剂器材 试剂 ⑴ 0.5％淀粉液 ⑵ 0.5％NaCl溶液 ⑶ 不同pH值缓冲溶液的配制:①1/15mol/L KH2PO4液：称取纯KH2PO4 9.078g加蒸馏水溶解并稀释成1000ml。②1/15mol/L Na2HPO4 液：称取Na2HPO4 ·2H2O 11.815g，加蒸馏水溶解并稀释成1000ml。上述两液下列比例混合均匀，即可得到不同pH值的缓冲溶液。 pH 5.0 6.6 8.0 1/15mol/L KH2PO4 9.9 5.0 0.1 1/15mol/L Na2HPO4 0.1 5.0 0.9 ⑷ 1％CuSO4溶液 器材 水浴锅、电驴、比色盘、试管 吸管、烧杯 三.实验方法及步骤 制备稀唾液：用清水漱口，含蒸馏水少许，咀嚼以刺激唾液分泌。在小漏斗中垫入一块薄薄的脱脂棉，直接将唾液吐入漏斗过滤。取过滤的唾液2ml加蒸馏水18ml混匀备用。 温度对酶促反应速度的影响 1.取试管3支，编号，按下表依次加入各种试剂。 试管号 试剂（ml） 1 2 3 0.5％淀粉溶液 3．0 3．0 3．0 PH 6.6缓冲液 1．0 1．0 1．0 现象颜色变化 2.混匀后，将1号、2号、3号试管分别置于沸水浴、温水浴（37～40℃）和冰水浴中5分钟，此间振荡之，使温度达到平衡。然后向各试管中加入稀唾液1ml混匀，15分钟后取出，并向各试管加碘液1滴，观察颜色变化并予以分析。 （二）pH对酶促反应速度的影响 1. 取试管4支，编号，按下表依次加入各种试剂。 试管号 试剂（ml） 1 2 3 0.5％淀粉液 3．0 3．0 3．0 PH 5.0缓冲液 1．0 PH 6.6缓冲液 1．0 PH 8.0缓冲液 1．0 稀唾液 1．0 1．0 1．0 2. 混匀后，将各管置于温水浴（37～40℃）中保温，此间每隔1分钟从第二管中取反应液1滴与碘混合观察颜色变化并记录。待第二管中反应液遇碘不发生颜色变化时，向各试管加碘液1滴，观察颜色并解释结果。 （三）激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响 1. 取试管3支，编号，按下表依次加入各种试剂。 试管号 试剂（ml） 1 2 3 0.5 ％淀粉液 2．0 2．0 2．0 PH 6.6缓冲液 1．0 1．0 1．0 蒸馏水 1．0 0.5 ％NaCl溶液 1．0 0.5 ％CuSO4溶液 1．0 稀唾液 1．0 1．0 1．0 2. 混匀后，将各管置于温水浴（37～40℃）中保温，每隔1分钟在比色盘上用碘检查第二管，待碘不变色时，冷却后分别加碘液1滴，观察颜色变化并解释结果。 试剂 ⑴ 0.5％淀粉液 ⑵ 0.5％NaCl溶液 ⑶ 不同pH值缓冲溶液的配制:①1/15mol/L KH2PO4液：称取纯KH2PO4 9.078g加蒸馏水溶解并稀释成1000ml。②1/15mol/L Na2HPO4 液：称取Na2HPO4 ·2H2O 11.815g，加蒸馏水溶解并稀释成1000ml。上述两液下列比例混合均匀，即可得到不同pH值的缓冲溶液。 pH 5.0 6.6 8.0 1/15mol/L KH2PO4 9.9 5.0 0.1 1/15mol/L Na2HPO4 0.1 5.0 0.9 ⑷ 1％CuSO4溶液 琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察 一.实验目的 通过实验进一步加深对竞争性抑制作用的理解。 二.实验原理 琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶，测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定 三羧酸循环途径是否存在。琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢，产生的氢可通过一系列传递体最后递给氧而生成水。琥珀酸脱氢酶