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浅谈红曲米中七株红曲霉纯培养的分离鉴定 关键词：红曲米；红曲霉；分纯；鉴定? 中图分类号：TS201.3??????????????????????? 文献标识码：A 自1884 年Van Tieghen 首次分离出红曲霉，至今已有百年的历史。近几年红曲霉的许多功效相继被证实后，红曲菌的相关专利陆续出现。自1975年至1997年为止各国关于红曲霉的专利将近200 篇[1]。目前红曲色素应用是红曲研究的主要方向，近20年有近40%的专利都在此领域。1979 年红曲霉被发现可产生胆固醇合成抑制剂，红曲霉降血糖、血压及胆固醇功效即成为众人关注的焦点 [2]。 另外作为食品添加剂也是红曲应用的主要方向，有关添加红曲成为功能性食品的专利有31篇，且多在日本申请。还有用于生产各种酶的专利15篇，以及在化妆品、处理废水、饲料上的应用[3]。对红曲霉的研究已从红曲色素扩展到有关降血压、血糖及胆固醇，红曲霉抗菌作用等多个方面。 本论文报道了对广西所产红曲米中红曲霉的分离纯化工作。对广西武宣一带的红曲米中的红曲霉进行分纯，得到了7个纯培养，进行了属的鉴定。发现其中一株有较为突出的抗菌能力（另文发表）；还有一株有较为突出的产红曲色素能力。研究成果扩大了红曲霉的菌种库，为发掘红曲霉生物资源做了有益工作。 1? 实验材料 1.1? 红曲米：取自广西武宣地区，是居民制作红糟酸所用的发酵剂。 1.2? 培养基：富集活化液：120Bx米曲汁900mL，乳酸7mL，无水乙醇100mL，于121℃灭菌20min，使用时以无菌操作加入30ppm链霉素。分纯培养基: 120Bx米曲汁900mL，6％NaCl，2％琼脂，121℃灭菌30min。 2? 研究方法 2.1 ?红曲霉的分纯与鉴定：取红曲米25粒放入100mL富集活化液中，30℃培养５天。采用 米曲琼脂汁培养基，对数稀释倾注法分纯。以无菌操作将生长迅速、健壮的菌落，挑取放到 富集活化液中继续富集活化，待培养5天后重复上述分纯操作，经过多次操作就可以分离得 到红曲霉纯培养。 ?? ?通过菌落形态、菌丝体形态观察，耐酒精、耐NaCl实验，进行红曲霉纯培养的鉴定。 2.2? 红曲霉产红曲色素的研究：用米曲汁培养基，遮光，32℃，160r/min 培养六天。用分光光度法测定总色价。 3? 实验结果 3.1 ?红曲霉的富集活化 活化培养的第二天，红曲米开始有附着的白色菌丝；第三天红曲米上浮，米身附着大量菌丝；第四天红曲米全部上浮，菌丝开始粘连；五天以后出现白色菌膜；七八天后白色菌膜转变为红色。根据菌体质量测定，红曲霉生长对数期大约处于第五、第六天，最适合用作接种材料。 3.2? 红曲霉的分离鉴定： 3.2.1? 菌落形态特征。红曲霉培养初期都为白色小菌落，经过培养后，菌落开始老熟，表面的颜色变化比较丰富，有的菌落颜色开始改变，逐渐变成橙色、浅蓝色、灰色、铅灰色和灰白色等；菌落的主要形状为皮膜状和绒毯状，大多菌落有放射状的沟纹，边沿一般比较整齐。得到7个纯培养，菌落特征见表1。 表1　 7株红曲霉纯培养的菌落形态 菌株?? 菌落大小?? 正面形态????? 皱折???? ?颜色??? 侧面观?? ??背面颜色???? 编号??? (mm)????????????????????????? ???????? M-1???? 38 ??????圆形绒垫状??? 辐射状???? 红色????? 凸起????? 深红色 M-2???? 20?? ????圆形皮膜状??? 有皱折???? 白色???? 不凸起 ?????红色?????? M-3???? 38?? ????圆形绒垫状??? 辐射状?? ??橙色?? ???凸起???? ??橙色 M-4???? 40?? ????圆形皮膜状??? 辐射状 ????白绿灰①　　不明显??? ??橙色 M-5???? 29?? ????圆形皮膜状??? 不明显? ???白铅绿②? 不凸起?? ???橙色 M-6???? 20?? ????圆形皮膜状??? 不明显?? ??白绿③? ??不凸起???? ?橙色 M-7???? 42?? ????圆形绒垫状??? 不明显?? ??白色???? 不凸起???? ?橙色 注:①菌落从里至外为三个色环，颜色依次为灰色、绿色和白色；②菌落从里至外为两个色环，颜色依次为灰色和白色；③菌落从里至外为两个色环，颜色依次为绿色和白色。 ? 3.2.2? 个体形态特征。30℃培养3天的红曲霉纯培养，用手术刀切取大小约1×1ｍｍ的菌苔，制成水浸片，镜检观察个体形态，7个菌株均观察到细胞横隔，有足细胞，梨形的分生孢子，有的还观察到闭囊壳结构．如图1。 ?????? 注：气生菌丝和足细胞??? ?注：分杈菌丝? ????????????注：闭囊壳 图1 　红