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实验四 细菌分离培养 [实验内容] 培养基的制备过程及常用培养基的种类 细菌的接种方法及无菌操作法 微生物的分布情况 常用消毒灭菌方法 药敏试验的操作方法 [实验目的] 了解培养基的制备过程及常用培养基的种类 学会细菌的接种方法及无菌操作法 知道微生物的分布情况，建立无菌观念 学会常用消毒灭菌方法并验证其杀菌作用 了解药敏试验的操作方法 [实验用品] 培养基 平皿 药敏试片 超净工作台等 [实验报告] 培养基制备原则 细菌接种法的种类 空气及咽喉部微生物的检查试验结果 皮肤消毒试验结果，你有什么启示 药物敏感试验（纸片法）结果分析 [实验内容摘要] 一、培养基的制备过程及常用培养基的种类 1、一般培养基的制备过程 准确称量培养基各成分——混合溶解——测定及矫正PH———分装、包装———灭菌——检定——保存 2、常用培养基的种类 根据不同细菌的营养要求及实验目地制成的培养基种类很多，按培养基的作用可分为 （1）基础培养基:含有细菌需要的最基本营养成分，如普通肉汤培养基，半固体培养基，普通琼脂培养基 （2）营养培养基：供培养营养要求较高的细菌用，如血琼脂培养基（在普通琼脂培养基中加入5%—10%脱纤维动物血）、血清肉 汤培养基（在普通肉汤培养集中加入血清） 另外还有选择培养基，可选择性的抑制非病原菌的生长，有利于分离病原菌，如依红美兰琼脂培养基、ss琼脂培养基。鉴别培养基是供厌氧培养基用以培养厌氧菌，如疱肉培养基。 二、细菌的接种法 1、平板划线接种法 标本上含有两种以上的细菌时，用平板划线接种法，获得纯菌。方法： 右手持接种环，在火焰上灭菌后，挑去葡萄球菌和大肠杆菌混合菌一环。 左手持琼脂平板，以左手平板和食指将平板盖启开，右手将取了军也得接种坏伸入平板，与平板培养基成45度角，划线后盖好平板。 于平板底部贴上标签（写明班级、组名、菌名、日期）,放入37摄氏度的温箱中24小时后，观察结果 2、半固体培养基接种法 （1）右手持接种环，火焰灭菌后，在琼脂平板上挑取单个大肠杆菌或痢疾杆菌落少许 （2）左手持半固体培养基试管，右手小指和无名指拔去试管塞，夹于指间（勿乱放）,试管口通过火焰灭菌，将挑有细菌的接种环伸入试管内，刺入半固体培养基至管底，沿穿刺线退出接种针，灭菌管口及接种针，塞试管塞。 （3）放置37摄氏度的温箱中培养24小时后，观察结果。 3、液体培养基接种法按照“2”法，用接种针或环挑取葡萄球菌或枯草杆菌或链球菌菌落少许，并拔取左手的肉汤管试管塞，将细菌接种于液体培养基内。灭菌试管口及接种针，赛试管塞，放置37摄氏度温箱中培养24小时后，观察结果。 三、微生物的分布检查试验 1、空气及咽喉部微生物的检查 （1）空气微生物的检查:取普通琼脂平板一个，将盖打开，暴露于空气中10分钟，然后盖上盖，置37摄氏度温箱培养24小时后，观察结果。 （2）咽喉部微生物的检查结果：每人取无菌棉棒一个，每两位同学互相于咽喉部涂抹采集标本，将棉棒以无菌操作涂于血平板一边缘，再用灭菌接种环将涂了标本的地方划线分离。置37摄氏度温箱培养24小时，观察结果。或取血平板一个，操作者将平板打开，于离口10厘米处，用力咳嗽数次。 四、消毒灭菌 1、皮肤消毒试验 将任一手指，在琼脂平板表面来回涂抹：将此手指用碘酒棉球做皮肤消毒，待干后，再在琼脂表面的另一处轻轻涂抹：将平板置37摄氏度温箱中孵育24小时后观察结果。 2、煮沸消毒实验 取四只肉汤管培养基，编号为1、2、3、4、号。1、2号管种大肠杆菌，3、4号管种枯草杆菌，将1、3号管放水浴锅中煮沸5—10分钟，再用灭菌锅过的接种环分别挑取4支肉汤管中的菌液，接种于相应的普通琼脂板上，然后置37摄氏度温箱中孵育24小时后观察结果。 紫外线杀菌试验 将金葡菌接种于普通平板上，将平皿盖打开一半，另一半遮在培养集上，将平板放在紫外线灯下照射30分钟，置37摄氏度温箱中孵育24小时后观察结果。 药敏敏感试验 1用无菌棉签沾取大肠杆菌或葡萄球菌液，密集的涂布在普通琼 脂平板上。 2用平头镊经火焰灭菌，待冷后夹取各种抗生素纸片分别贴于涂有细菌得平板表面，置37摄氏度温箱中培养24小时后，观察结果。 3观察结果 若大肠杆菌或葡萄球菌对某种抗生素敏感，则在该抗生素纸片周围有一圈无细菌生长的区域，称抑菌圈。 病原生物学与免疫学基础 精品课程 1