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药物定量分析与分析方法验证 凯氏定氮法原理 NH2－硝化生成NH4＋： 与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中 用已知浓度的H2SO4（或HCl）标准溶液滴定，根据酸消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 消解剂 作用：缩短消解时间，避免铵盐分解。 硫酸钾：提高硫酸沸点，以提高消解温度； 催化剂：汞盐、硒盐、铜盐等，其中以硫酸铜最常用。 对于含氮杂环结构，消解中需要加入辅助氧化剂，使分解完全并缩短消解时间，常用为30%过氧化氢和高氯酸。 仪器装置与操作 半微量法 注意事项 干法破坏 适用范围：主要用于含X、S、P等有机药物，也用于含硒和砷盐的检查 分类： 1）高温炽灼法： 高温灼烧灰化转变成无机元素或盐； 主要用于：含X、P和砷盐检查 2）氧瓶燃烧法 高温炽灼法 氧燃瓶燃烧法 吸收液的选择 定量分析方法特点 4. 分离、纯化与富集 液-液萃取：有机溶剂1-2:1，注意pH值对萃取的影响 液-固萃取：乳化少、萃取效率高，填料：正相（硅藻土）和反相（活性炭、C18） 组分富集：减少萃取体积、 样品浓缩、柱切换技术 思考题 测定方法的效能指标包括哪些？ 精密度表示方法有哪些？ 什么是准确度？怎么测定 三、色谱分析法 按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 方法分类 按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC （一）HPLC法 1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。 色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系统性试验 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于1.5 拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～ 1.05 重现性： 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 3. 测定方法 标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法 应用示例： RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法 如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法 （二）GC法 1. 对GC仪器一般要求 载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱 色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系统性试验 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于1.5 拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～ 1.05 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 3. 测定方法 标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法 应用示例： Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注 射剂、甲