1油镜的使用、细菌的简单染色.pptVIP

教学计划 农学院 15学时 5个实验 生科院 30学时 9个实验 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退、迟到，不准大声喧哗 实验服 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火。 正确使用化学试剂、菌种和仪器。 实验一 油镜的使用、细菌的简单染色 显微镜的使用 1.普通光学显微镜的构造 （1）机械装置 （2）光学系统 2. 光学显微镜的工作原理 最小分辨距离（D）=λ/（2 N ·A ）= n=介质折射率 θ=光线入射角半数 与其他物镜不同，油镜需在载玻片与镜头之间加滴镜油，原因有二： 1）.增加照明亮度 油镜的放大倍数可达100x，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。为了不使通过的光线有所损失，必须加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油。通常用香柏油（n=1.52）. 2）.增加显微镜的分辨率 油镜的分辨率可达到0.2μm左右。 显微镜保养和使用中的注意事项 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜用完后，将载物台降至最低，并将最低倍数物镜或物镜的空位正对载物台。 细菌的单染色 单染色法是用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨别细菌细胞的构造，通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红 等）使其着色。当在中性、弱碱性、弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷。而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷， 因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。 染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 实验材料 单目普通光学显微镜 番红、结晶紫 牙签、染色缸、载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、乙醇-乙醚混合液（3:7）、生理盐水、擦镜纸、吸水纸等。 实验步骤 1.染色 1）取一干净载玻片。 2）在载玻片中间滴一小滴生理盐水。 3）用牙签取少量牙垢，涂在生理盐水中，混匀并涂成薄膜。 4）自然干燥。 5）火焰固定。 6）染色：用结晶紫或番红染色一分钟。 7）水洗。 8）自然干燥。 染色中注意事项： 1、涂片不可太厚 2、固定时不能在火上烤的时间太长，否则菌体收缩变形 3、染色后必须晾干后才能用油镜镜检。 实验步骤 2.镜检 将制好的玻片在低倍镜下确定其位置 然后再在高倍镜下观察 最后滴上一滴香柏油放在油镜下观察 侧视用粗调升载物台至最高，然后缓慢下降至清晰，仔细观察，并将其绘制下来。 实验步骤 3.擦镜 先用擦镜纸将油镜由里圈向外圈擦一遍 然后再取一张擦镜纸，滴上乙醇-乙醚混液，将油镜由里圈向外圈擦一遍 最后再用干净擦镜纸擦两遍即可 4.整理实验器具 作业 1、绘制牙垢中的细菌形态。示例： 2、严格按照要求填写实验报告。 注意：原始数据和现象真实记录。 描述、分析实验现象。 对实验结果进行分析。 写心得和体会。 * * 卫生 每次实验需留下6位同学值日，保持实验室清洁，负责关门窗、水电。 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握不同显微镜的使用方法是很有必要的。 2 1 光波长度（ λ ） 数值口径（n sinθ） 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 7.0 40× 0.65 0.65 100× 1.30 0.15 16×100，番红染色 球菌 杆菌 螺旋菌 牙垢