2、革兰氏、荚膜、放线菌.pptVIP

实验二 细菌革兰氏染色、细菌荚膜观察、放线菌观察 一、菌种： 1、革兰氏染色：大肠杆菌 （Escherichia coli E. coli） 金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus S.a.） 2、荚膜观察：胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus B.m） 3 、放 线 菌： 吸水链霉菌（） 二、操作 (一)革兰氏染色、观察 1、涂片：无菌操作取 S. a 和 E. coli 菌体， 先在玻片A 上分别制成母液，再在 玻片 B 上做三个涂片区 2、干燥：自然干燥（勿火烤） 3、固定 ：干燥后通过火焰固定。 4、初染：结晶紫染 1分钟，水洗。 5、媒染：碘液染 1分钟，水洗。 6、脱色：连续用95％乙醇脱色20－30秒， 立即水洗。 7、复染：番红染色1－2分钟，水洗， 吸水纸吸去多余水分 8、镜检：按10x ，40x ，100x顺序镜检， 观察两种菌的菌体形态、颜色变化 * 玻片A：制菌体母液 作三个涂片区 玻片B： 革兰氏染色 混合区 拖动 黑素 菌体涂片 菌体 （二）荚膜染色(负染色法) 1、涂片：用接种环取胶质芽胞杆菌浸入载玻片 片上的水滴（少量）中, 充分混匀并涂片片，涂片面积尽量大,不必干燥即可进行下步: 2、刮片：在载玻片的一侧加一滴黑素，另取一一块边缘平整的载玻片，将其边缘浸入黑素 中，倾斜一定角度向右端拖动（只拖一 次），将黑素涂成一薄层 。 3、镜检：10x ，40x 物镜观察 （注意物镜不要接触黑素，不要用100x油镜） （三）插片法观察放线菌 １、制片：从链霉菌培养基上轻轻拔出一片盖玻片,用擦镜纸将盖 玻片 两面中的一面的菌丝擦干净,另一面的菌丝保留。在另一载 玻片上滴一小滴香柏油（不可过多，可用接种环蘸取）,将盖玻 片 片借助香柏油粘在载玻片上,有菌丝的一面向上。 ２、固定：有菌的一面向上，载玻片通过酒精灯火焰3－4次 ３、染色：复红染2-3分钟，再水洗（注意勿将盖玻片从载玻片上冲下来） 　４、水洗、晾干、镜检：用10x ，40x ，100x 物镜观察 气生菌丝、孢子丝的形态。 三、作业： １、分别绘制 40x物镜下的胶质芽 孢杆菌形态和 100x 油镜下 E. coli、S.a、链霉菌的 形态， 注明各部分结构名称。 ２、说说在革兰氏染色的四步中， E. coli和S.a的颜色变化 　　 盖玻片 链霉菌菌丝面向上 香柏油 载玻片 *