BIO-RAD双向电泳培训(正式资料).docVIP

双向电泳实验流程 样品制备（Sample preparation） 固相预制胶条的水化（IPG strip rehydration） 第一向等电聚焦（IEF） 胶条的平衡（IPG strip equilibration） 第二向SDS电泳（SDSelectrophresis） 凝胶的染色及检测（Detection/Staining） PDQuest软件分析（Software analysis） 质谱鉴定（Protein identification）  目　　录 第一章　　双向电泳 1. 1 溶液配制 1. 2 操作步骤 1. 3 注意事项 第二章　　订货信息 附录1 双向电泳完整的操作步骤 附录2　　聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置 附录3　　细胞样品的一般处理步骤 附录4　　组织样品的一般处理步骤  第一章 双向电泳 1. 1 溶液配制 水化上样缓冲液（I） 尿素 8M 4.805g CHAPS 4% 0.4g DTT 65mM 0.098g（现加） Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50(l（40%）（现加） 溴酚蓝 0.001% 10(l（1% 溴酚蓝） MilliQ水 定容至10ml 分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。 水化上样缓冲液（II） 尿素 7M 4.2g 硫脲 2M 1.52g CHAPS 4% 0.4g DTT 65mM 0.098g（现加） Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50(l（40%）（现加） 溴酚蓝 0.001% 10(l（1% 溴酚蓝） MilliQ水 定容至10ml 分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。 水化上样缓冲液（III） 尿素 5M 3.0g 硫脲 2M 1.52g CHAPS 2% 0.2g SB 3-10 2% 0.2g DTT 65mM 0.098g（现加） Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50(l（40%）（现加） 溴酚蓝 0.001% 10(l（1% 溴酚蓝） MilliQ水 定容至10ml 分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。 胶条平衡缓冲液母液 尿素 6M 36g SDS 2% 2g Tris-HCl 0.375M pH8.8 25ml（1.5M pH8.8 Tris-HCl） 甘油 20% 20ml MilliQ水 定容至100ml 分装成10管，每管10ml，-20℃冰箱保存。 胶条平衡缓冲液I 胶条平衡缓冲液母液 10ml DTT 0.2g 充分混匀，用时现配。 胶条平衡缓冲液II 胶条平衡缓冲液母液 10ml 碘乙酰胺 0.25g 充分混匀，用时现配。 低熔点琼脂糖封胶液 低熔点琼脂糖 0.5% 0.5g Tris 25mM 0.303g 甘氨酸 192mM 1.44g SDS 0.1% 1ml（10% SDS） 溴酚蓝 0.001% 100(l（1%溴酚蓝） MilliQ水 定容至100ml 加热溶解至澄清，室温保存。 30% 聚丙烯酰胺贮液 丙烯酰胺 150g 甲叉双丙烯酰胺 4g MilliQ水 500ml 滤纸过滤后，棕色瓶4℃冰箱保存。 1.5mol/L Tris碱 pH8.8 Tris碱 90.75g MilliQ水 400ml 用1mol/L HCl调pH至8.8，加MilliQ水定容至500ml。4℃冰箱保存。 10% SDS SDS 10g MilliQ水 100ml 混匀后，室温保存。 10% Ap Ap 0.1g MilliQ水 1ml（用时加水溶解） 溶解后，4℃冰箱保存。 10×电泳缓冲液 （1×= 25mM Tris，192mM glycine，0.1% SDS，pH8.3） Tris碱 30g 甘氨酸 144g SDS 10g MilliQ水 1L 混匀后，室温保存。 1. 2 操作步骤 （一）第一向等电聚焦（用自制溶液） 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Ly