植酸酶耐热性评价方法的研究.docVIP

植酸酶耐热性评价方法的研究 制粒对植酸酶活性的影响一直是限制植酸酶进一步推广应用的重要因素,针对这一问题,目前解决的方法有提高植酸酶添加量、包被技术、采用液体植酸酶制粒后喷涂技术、通过微生物菌株遗传改良开发耐高温植酸酶产品等。不管是哪种途径,制粒对植酸酶活性的影响是不可避免的,有效评价制粒过程中植酸酶活性的损失具有重要的应用价值。研究旨在系统比较水浴法、干热法和湿热法在评价植酸酶耐热性的效果,并比较同一温度条件下水浴法、干热法和湿热法测定结果与实际调质和制粒加工处理条件下的测定结果,来筛选相对科学、更能反映实际调质和制粒对植酸酶活性影响的实验室评价方法。 1 材料与方法 1. 1 试验材料 试验用植酸酶A、B、C来源于目前市场上具有代 表性的产品,其中植酸酶A来源于真菌;植酸酶B来 源于细菌;而植酸酶C来源于真菌,但经过了包被处 理。 1. 2 试验方法 水浴法:正确称取酶样品0. 8 g,转移到100 mL 容量瓶中,用含有吐温-20的乙酸缓冲溶液定容至 100 mL,提取45 min。待溶解混合完成后,分别取3 个10 mL离心管,分别取1 mL上述溶液转移到离心 管中,再用含有吐温-20的乙酸缓冲溶液定容至 10 mL,分别置于70, 80, 90e水浴锅加热10 min (5 min预热, 5 min加热处理),取出用于测定高温处 理后溶液中植酸酶活性。 干热法:用称量瓶(30mm@50mm)分别称取2 g 植酸酶A、B、C样品,置于70, 80, 90e恒温烘箱中处 理10 min(其中前5 min为预热期),取出冷却后备 用。 湿热法:先测定各种植酸酶样品中水分含量,用 称量瓶(30mm@50mm)分别称取2 g植酸酶A、B、C 样品,根据植酸酶样品中水分含量并通过添加纯化水 的方法调节待处理植酸酶样品中水分至16% (模拟 实际调质和制粒时配合饲料通入蒸汽后湿度),置于 70, 80, 90e恒温烘箱中处理10min(其中前5min为 预热期),取出冷却。 实际调质和制粒加工处理:在配合饲料生产车间 收集分别添加植酸酶A、B、C的调质和制粒前粉状饲 料和制粒后颗粒饲料样品,备用。 1. 3 测定指标及方法 各个植酸酶样品和制粒后样品、水浴法中温度处 理前后的植酸酶溶液、配合饲料调质和制粒前样品和 制粒后样品中植酸酶活性的测定采用欧盟(2004)建 立的方法。 1. 4 植酸酶活性损失率的计算 植酸酶活性损失率(% )=(温度处理前植酸酶 活性-温度处理后植酸酶活性)A温度处理前植酸 酶活性@100%。 1. 5 数据处理 所有数据均为3个平行样品结果的平均数,对试 验数据采用Sas6. 12作相关性分析。 2 结果与分析 2. 1 实验室条件下温度对植酸酶活性的影响 实验室模拟制粒调质和温度对植酸酶活性影响 的结果见表1。由表1可知,水浴法分别模拟70, 80, 90e调质和制粒条件下,随着温度的上升,植酸酶A 的活性损失率线性增加(y= 2.056 5x- 115.8, R2= 0.95),特别是90e温度条件下,植酸酶活性损 失率可达72. 11%;植酸酶B的活性损失率线性增加 (y=2.134x- 116.23,R2= 0.95),特别是90e温 度条件下,植酸酶活性损失率可达78. 79%;植酸酶C 的活性损失率线性增加(y= 0.727x+ 23.513,R2 = 1.00),特别是90e温度条件下,植酸酶活性损失 率可达89. 02%。比较植酸酶A、B、C发现, 70e条 件下,植酸酶C活性损失最大,而植酸酶A活性损失 最小,即植酸酶A稳定性最好; 80e条件下,植酸酶 C活性损失最大,而植酸酶A活性损失最小,即植酸 酶A稳定性最好; 90e条件下,植酸酶C活性损失最 大,而植酸酶A活性损失最小,即植酸酶A稳定性相 对最好。 53 5黑龙江畜牧兽医62008年第2期表1 实验室模拟制粒调质和温度对植酸酶活性的影响 处理温度 /e 热处理 方法植酸酶活性变化植酸酶A植酸酶B植酸酶C 70水浴法热处理前/(FTP#kg-1) 6 082. 28 5 552. 26 5 022. 24 热处理后/(FTP#kg-1) 4 197. 76 3 547. 60 1 281. 47 活性损失/% 30. 98 36. 11 74. 48 干热法热处理前/(FTP#kg-1) 6 082. 28 5 552. 26 5 022. 24 热处理后/(FTP#kg-1) 5 283. 67 4 964. 83 4 426. 10 活性损失/% 13. 13 10. 58 11. 87 湿热法热处理前/(FTP#kg-1) 6 082. 28 5 552. 26 5 022. 24 热处理后/(FTP#kg