局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子κB的表达_医学论文.docVIP

局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子的表达_医学论文 局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子的表达_医学论文 【摘要】 目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后杏仁核和海马环氧酶、5脂氧酶(5和核因子的表达情况,探讨其损伤机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞2 h/再灌注24 h模型。免疫组织化学法检测杏仁核和海马COX、5和NF蛋白表达,计数COX、5和NF阳性细胞数,Motic Images Advanced 3.0图像分析系统作半定量分析。结果CIRI后大鼠杏仁核和海马COX、5和NF阳性细胞计数明显增高(0.001),平均灰度值显著下降,表达增强(0.001)。结论CIRI后大鼠杏仁核和海马区域的COX、5和NF表达增强,继而引发后续反应,介导神经损伤。 【关键词】 脑缺血 再灌注损伤 杏仁核 海马 环氧水解酶类 杏仁核和海马是边缘系统的重要核团,它们之间不仅解剖位置紧临,其关系也很密切。目前对海马在脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)中神经细胞的凋亡情况已有报道[1]。本课题组既往的研究表明,局灶性CIRI后大鼠杏仁核出现缺血坏死、水肿,正常锥体神经元密度减少[2],其机制可能与MMP9、AQP4表达增加有关。笔者从花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢通路主要限速酶——环氧酶和5脂氧酶(5在CIRI中的活化,以及核因子介导神经细胞损伤的角度,研究局灶性CIRI后大鼠杏仁核和海马COX、5和NF的表达情况,以期进一步探讨杏仁核和海马在CIRI中的损伤机制。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1动物Sprague大鼠,雄性,体质量(250±25)g,福建医科大学实验动物中心提供(合格证号:闽实动质准第002号)。术前12 h禁食,自由饮水。 1.1.2试剂和仪器光学显微镜及摄像系统(日本Olympus公司)Motic Images Advanced 3.0图像分析系统(香港麦克奥迪公司)5、COX、NF兔抗大鼠单克隆抗体(美国Cayman公司)SABC兔IgG免疫组织化学试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉Boster公司)枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液(北京中山生物技术有限公司)其余试剂均为国产分析纯。 1.2方法 1.2.1模型制备SD大鼠随机分假手术组和模型组。模型组参照文献[3]线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,假手术组不插入栓线,其他手术操作相同。 1.2.2标本制作缺血2 h/再灌注24 h时,迅速断头取脑,去除小脑及嗅球,取视交叉至漏斗柄的脑片置于4%甲醛溶液中固定gt1周,常规脱水、透明、浸蜡、包埋,冠状切片5 μm,贴于多聚赖氨酸处理的载玻片上,免疫组织化学染色,观察各指标。 1.2.3COX、5和NF蛋白在杏仁核和海马的表达免疫组织化学SABC法分别检测损伤侧杏仁核和海马COX、5和NF的蛋白表达,均按试剂盒说明书逐项操作,室温显色。于10×40视野下随机选取相应区域5个不重叠视野进行阳性细胞计数,COX、5阳性细胞的细胞质呈棕黄色,核淡染NF阳性细胞的细胞质呈棕黄色,核深染。应用Motic Images Advanced 3.0图像分析系统行半定量分析,计算阳性细胞的平均灰度值。 1.3统计学处理采用SPSS 13.0软件进行统计分析,实验数据以x±s表示,各参数间的比较采用t检验。 2结果 A:假手术组 B:杏仁核 C:海马.COX环氧酶； 5：5脂氧酶；NF：核因子 图1损伤侧杏仁核和海马环氧酶、5脂氧酶和核因子蛋白的表达(×400) Fig 1The changes of COX2,5LO and NFκB proteins in amygdale and hippocampus of the injured brain tissue(×400)2.1COX2的表达假手术组脑组织基本没有COX2阳性细胞的表达,杏仁核和海马未见阳性细胞表达模型组杏仁核和海马见大量COX2阳性细胞(图1),杏仁核区阳性细胞为(28.8±3.2),海马区为(30.4±2.9),且平均灰度值均明显下降,提示模型组杏仁核和海马COX2的表达增强(0.001,图2,3)。 2.25LO的表达假手术组脑组织仅有少量5LO阳性细胞表达,杏仁核和海马未见阳性细胞表达模型组杏仁核区阳性细胞为(30.7±3.0),海马区为(32.8±3.5),两区域阳性细胞表达数明显增多(0.001,图1),平均灰度值下降,5LO表达增强(图2,3)。 2