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微波辅助萃取－分光光度法测定细梗胡枝子叶中总黄酮的含量_药学论文 微波辅助萃取－分光光度法测定细梗胡枝子叶中总黄酮的含量_药学论文 作者：张帆，齐小花，邹明强，解瑞丽，李锦丰，杨屹，张宏桂 【摘要】 　　目的采用微波辅助萃取法提取，以分光光度法测定细梗胡枝子叶中的总黄酮含量。方法单因素法优化微波提取条件为：使用75%乙醇，在液固比70 ml/g下，加热至75℃后持续辐射15 min。结果与传统的乙醇浸提法和超声法相比，微波法具有操作简便，经济可靠，重现性好等特点。结论微波法适合推广应用于各类中草药中总黄酮含量测定的样品前处理。 【关键词】 微波辅助萃取 分光光度法 细梗胡枝子 总黄酮 　　Abstract：ObjectiveTo extract total flavones from Lespedeza virgata (Thunb.) DC. by microwave-assisted extraction and determine its content by absorption spectroscopy. Methods The extracted conditions of flavones were optimized as 70 ml/g of 75% ethanol to leaves weight ratio and solution temperature of 75℃ for 15 min. ResultsCompared with moceration and ultrasonic-assisted extraction, microwave-assisted extraction was simple and accurate with good reproducibility. Conclusion It is suitable for the determination of flavone in many kinds of traditional Chinese medicines. 　　Key words：Microwave-assisted extraction (MAE); Absorption spectroscopy; Lespedeza virgata (Thunb.) DC.; Flavones 　　胡枝子属植物含黄酮、生物碱、萜类、甾醇、有机酸、鞣质等多种化学成分［1～6］，有抗炎、抗过敏、抗早孕、镇痛等药理活性，特别是黄酮类化合物对肾功能不全的治疗作用尤为显著。细梗胡枝子为豆科植物细梗胡枝子Lespedeza virgata (Thunb.) DC.的干燥全草，可用于治疗慢性肾小球肾炎、肾盂肾炎、肾结核及肾萎缩等疾病。现代药理学研究表明，该药所含的多种黄酮类化合物能降低血中残余氮，改善肾功能，影响离体子宫的作用，此外还具有抗炎、抗早孕、抗过敏及止痛等作用［6］。 　　自Ganzler［7］首次将微波辅助技术（microwave-assisted extraction，MAE）应用于植物样品提取以来，MAE在天然植物提取中的应用越来越受到重视［8～14］。本文仅就该项技术应用于细梗胡枝子中黄酮类化合物的提取进行研究，并用分光光度法对总黄酮含量进行测定，建立了细梗胡枝子叶中总黄酮的微波辅助萃取－分光光度测定法。现报道如下。 　　1 仪器与试剂 　　XH-100A型祥鹄电脑微波催化合成/萃取仪（祥鹄科技发展有限公司），具有温度控制部件，设计温度±1℃。U-3010/3310分光光度计（天美科技有限公司）。 　　细梗胡枝子（购自湖南省沅陵县）；芦丁标样（中国药品生物制品检定所）；乙醇、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠等试剂均为分析纯。 　　2 方法 　　2.1 样品的处理 　　先将细梗胡枝子叶粉碎后过60目的筛子，之后用烘箱烘至恒重保存。准确称取1.0 g细梗胡枝子粉于圆底烧瓶中，按要求加入一定量的乙醇，控制一定温度，在一定的微波功率下微波萃取一定时间，过滤，定容，取一定量试液进行显色、测定。 　　2.2 总黄酮含量的测定 　　在10 ml容量瓶中，取少量样品溶液，依次加入若干毫升的NaNO2溶液，Al(NO3)3溶液和NaOH溶液，然后用乙醇溶液定容至10 ml，于室温下放置10 min，用1 cm比色皿，以试剂空白为参比，在选定波长下测定其吸光度［15，16］。根据标准曲线求得总黄酮的提取率，其计算公式为：提取率(mg/g)＝X×V/m，其中X是从标准曲线上查得的浓度值，V为萃取液体积，m为细梗胡枝子叶的质量。 　　3 结果 　　3.1 测定波长的选择取适量总黄酮萃取液进行显色反应，用分光光度计对其红色产物在400～700 nm之间扫描，在510 nm处有最大吸收，所以确