木犀草素的体外抗炎机制研究_医学论文.docVIP

木犀草素的体外抗炎机制研究_医学论文 木犀草素的体外抗炎机制研究_医学论文 【摘要】 【目的】观察木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264细胞(小鼠单核/巨噬细胞系)核因子κB(NF和环氧合酶2(COX表达及NF结合活性的影响，探讨其体外抗炎机制。【方法】以RAW264细胞为研究对象，选用对数生长期的细胞，分别设空白对照组，脂多糖(LPS)处理组(模型组)，5、15、45?μmol/L木犀草素处理组(中药低、中、高剂量组)；加入药物30?min后再加入终浓度为1?μg/mL的LPS继续培养12?h，分别采用酶免疫测定法（EIA）检测木犀草素对RAW264细胞前列腺素E２(PGE2）生成的影响；电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF的DNA结合活性；逆转录聚合酶链反应（RT）测定RAW264细胞中COX的水平；Western blot法测定RAW264细胞中NF和COX蛋白的表达。【结果】木犀草素能显著性抑制LPS诱导的RAW264细胞PGE2的生成，降低NF的DNA结合活性；下调LPS诱导的RAW264细胞COX、NF和COX蛋白的表达。【结论】木犀草素的抗炎作用可能与其能抑制核内NF的表达和DNA结合活性从而下调COX的表达有关。 【关键词】 木犀草素/药理学；炎症/中药疗法；信号传导；基因表达调控；细胞培养 　　 　　【Objective】To investigate the in 　　 　　【Methods】RAW264d luteolin groups (treated with 5, 15, and 45 μmol/L luteolin respectively). After being treated with luteolin for 30 min and then incubated with 1μg/mL LPS for 12 hours, the change of prostaglandin E2 (PGE２) level was observed by enzyme immunoassay (EIA), DNAbinding activity of NFκB was detected by electrophoretic mobility shift assay (EMSA), mRNA expression of COX2 was examined by reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR), and NFκB and COX2 protein expression in RAW2647 cells was analysed by Western blotting. 　　 　　【Results】Luteolin obviously inhibited the formation of PGE２, decreased DNAPS. 　　 　　【Conclusion】The anti 　　Key words:LUTEOLIN/pharmacologyINFLAMMATION/TCD therapySIGNAL TRANSDUCTION；GENE EXPRESSION REGULATION；CELL CULTURE 　　木犀草素(Luteolin)属于黄酮类化合物，主要存在于菊花、忍冬花、紫苏叶等天然药物中，研究表明木犀草素具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节等多种作用［1-3］，木犀草素的抗炎作用与其抑制炎症介质的释放和核因子κB（NF）介导的基因表达有关［３-４］。本文观察了木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的RAW264细胞NF表达、DNA结合活性以及对环氧合酶表达的影响，以进一步探讨木犀草素抗炎的作用机理。 　　1材料与方法 　　1药品及试剂木犀草素（纯度＞98%）和前列腺素E2酶免疫分析试剂盒（PGE2 EIA Kit）均为美国Cayman公司产品；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、二甲基亚砜（DMSO）、焦碳酸乙二酯（DEPC）等为Sigma公司产品；RPMI为Gibco公司产品；超级小牛血清为杭州四季青生物工程公司产品；总RNA提取试剂（Trizol）为Invitrogen公司产品；逆转录聚合酶链反应（RT）一步法试剂盒为宝生物（大连）工程有限公司产品；100?bp?DNA?marker、N,N,N,N四甲基乙二胺（TEMED）、6倍上样缓冲液均为华美生物工程公司产品；增强化学发光（ECL）试剂、抑酞酶（Aprotinin）均购于上海华舜生物工程有限公司；β山羊IgG多克隆抗体、NF小鼠IgG单克隆抗体和COX山羊IgG多克隆抗体均为北京中山公司产品；聚偏(二)氟乙烯（PVDF）膜为美国Pa