柱层析—分光光度法测定益母草中总黄酮含量_药学论文.docVIP

柱层析—分光光度法测定益母草中总黄酮含量_药学论文 柱层析—分光光度法测定益母草中总黄酮含量_药学论文 作者：余丹妮，徐德生， 冯怡，卫洪昌【摘要】 目的建立益母草药材总黄酮含量测定方法，并对药材资源进行初步考察。方法以芦丁为对照品，样品经聚酰胺柱分离纯化，三氯化铝试剂显色后，采用紫外分光光度法在412 nm波长处测定总黄酮含量。结果芦丁在4.8～29.0 μg/ml范围内与吸光度有良好线性关系，r=0.999 6，平均回收率为102%，RSD=3%。结论该方法操作简单、准确，可作为益母草药材的质量分析方法。 【关键词】 益母草； 总黄酮； 柱层析—分光光度法　　Abstract：ObjectiveTo establish the method for the quantitative determination of total flavonoids in Herba Leonuri, make the prime examination of the resources.MethodsThe sample was treated with a polyamide column for separation and purification ,and was colorated with aluminium trichloride ,and then,the content of flavone in the sample was determined at the wavelength of 412 nm by ultraviolet spectrophotometer with rutin as control.ResultsIt showed a good linear relationship in the range of 4.8～29.0 μg/ml，r=0.9996 the average recovery of the added sample was 102% and RSD was 3% .ConclusionThe method is simple and accurate. It can be used for the quality control. 　　Key words：Herba Leonuri; Total flavonoids; Column chromatogram UV spectrophotometry 益母草为唇形科益母草属植物Leonurous heterophyllus Sweet的干燥地上部分，性味苦、辛、微寒，归肝、心包经，具有活血化淤、利尿消肿的功效［1］。主要含生物碱、二萜、环烯醚萜苷、黄酮、有机酸等成分［2］。《中国药典》以生物碱作为益母草药材的含量测定指标。近几年来，黄酮成分开始受到专家和学者的关注。益母草中含有多种黄酮，如芦丁、槲皮素、山柰素及苷，洋芹素、芫花素及苷等［3］，研究表明益母草黄酮在心血管方面药理作用显著［4］。益母草药材和制剂中总黄酮含量测定报道不多，绝大部分是药材经初步提取后直接测定，половдмидр首次将柱层析引入益母草药材和制剂的含量分析［5］。目前，益母草总黄酮含量测定仍存在较大不足，如提取、除杂方式选择混乱导致测定干扰成分较多、显色方法选择缺乏依据等等，同时未见益母草药材中总黄酮资源的报道。本实验通过薄层色谱模拟柱层析条件，确定了药材的除杂方式，对益母草药材总黄酮含量测定方法进行了系统考察，并测定了6个地区益母草药材的总黄酮含量。 　　1 仪器与试药 Aglient8453紫外可见分光分析仪，752-N型分光光度计（上海分析仪器厂），BP211D sartorius电子天平。 益母草（6个产地药材分别购自上海康桥中药饮片有限公司、齐齐哈尔市百合中药饮片加工有限责任公司、河南光山县药材公司、广州市健和中药饮片有限公司、安徽亳州药材市场、广东市药材市场，经上海中医药大学生药教研室周秀佳老师鉴定均为唇形科植物益母草Leonurus heterophyllus Sweet）。 芦丁、槲皮素、山柰素对照品（均购自上海标准化中心）；聚酰胺薄膜、柱层析用聚酰胺80～100目（浙江台州市路桥四青生化材料厂产品）；甲醇、无水乙醇、氯化铝、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 显色方法的选择亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠和三氯化铝为总黄酮测定中最常用的显色剂［6，7］。前者显色后测定波长为510 nm左右，后者在410 nm或270 nm附近。因益母草药材在500 nm处有较多的干扰吸收，且样品溶液中存在的槲皮素、山柰素等黄酮成分，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色后在500 nm处吸收较弱或无吸收［8］，因此，采用亚硝