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柱形藻酸钙载体复合细胞修复异体兔膝关节软骨缺损_医学论文 柱形藻酸钙载体复合细胞修复异体兔膝关节软骨缺损_医学论文 作者：刘松波，胡蕴玉，徐虎，吕荣，徐建强 【关键词】 钙藻酸盐 　　关键词: 钙藻酸盐软骨细胞移植，同种 　　摘 要:目的 应用柱形藻酸钙载体复合软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损，为骨关节病的组织工程学修复提供一定的实验依据. 方法 应用自行制作的柱形藻酸钙载体复合消化分离的兔关节软骨细胞，共同植入异体兔膝关节软骨缺损处，分别于术后4，8和12wk观察大体标本及组织学修复结果. 结果 术后8wk时缺损处可见一定程度的修复，到12wk时大体标本修复较好，修复组织与周围关节面界限不清，组织学见缺损处表现为软骨组织修复. 结论 通过短期观察说明藻酸钙可以作为软骨细胞的载体材料，用于关节软骨缺损修复的组织工程学研究. 　　Keywords:calciumalginatechondrocytestransplantation，homologous 　　Abstract:AIM To reconstruct the joint cartilage defects with calcium alginate column combined with rabbit chondro-cyte as allografts to assist the tissue engineering method in repairing joint cartilage injury.METHODS Calcium alginate columns manipulated in our laboratory were used as polymer scaffolds complicated with chondrocytes to fill in the articular cartilage defects of rabbit knee.Gross and histological sam-ples of the animal joints were examined at4，8and12wk postoperatively.RESULTS By the end of8wk cartilage　repair occurred and living chondrocytes could be found.Bet-ter results took place at12wk that neocartilage tissue formed and the defects could hardly be seen roughly.CONCLUSION Calcium alginate column might act as a polymer scaffold of chondrocytes and be used in the research on joint cartilage re-construction. 　　0 引言 　　关节软骨损伤后的修复一直是困扰骨科基础及临床研究的难点课题，已尝试应用的方法如关节软骨下骨钻孔，骨膜或软骨膜修补以及人工生物材料修复，均有待临床进一步应用验证.组织工程学的方法对膝关节软骨损伤有重要的应用前景.我们根据海藻酸钠与二价阳离子结合的特殊性质，制备了藻酸钙柱形载体，并将其与软骨细胞结合修复兔膝关节软骨缺损. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　海藻酸钠粉剂（Fluca公司），葡萄糖酸钙注射液（无锡第七制药厂），小牛血清（杭州四季青生物制品公司），胰蛋白酶（华美生物工程公司），Ⅱ型胶原酶，DMEM高糖培养基（Gibco公司）.软骨细胞的消化分离及与载体复合:取3wk龄新西兰白兔1只，雌雄不限，无菌切取双膝关节软骨并剪成约0.5mm×0.5mm碎片，置10mL离心管中，以含抗生素生理盐水冲洗，离心后经2.5g#12539L -1 胰蛋白酶消化30min，盐水洗2次，2g#12539L-1 胶原酶洗1次，继而消化90min，吸取上清，离心收集细胞于10mL离心管中，加入含200mL#12539L-1 小牛血清DMEM培养基0.5mL，取自行制备的藻酸钙载体4枚，以无菌纱布轻压吸干其内的DMEM后加入上离心管中，共同置37℃，含50mL#12539L-1 CO2 孵箱中2h.残余软骨粒继续以胶原酶消化，每90min收集1次，共可收集4次，其后处理步骤同上. 　　1.2 方法 　　修复兔膝关节软骨缺损用新西兰白兔12只（2～3mo龄，本校实验动物中心），雌雄不限，麻醉，消毒铺单后双膝髌内侧纵切口约2cm，将髌骨向外侧脱位，显露髌股关节的股骨面，于股骨滑车中央用电钻钻