正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺_药学论文.docVIP

正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺_药学论文 正交实验法筛选千斤拔多糖的提取分离工艺_药学论文 【摘要】 　　目的研究千斤拔多糖的提取分离的最佳工艺条件。方法采用正交设计法筛选。结果千斤拔多糖的最佳提取分离工艺为：采用加热回流法，石油醚（30～60 ℃）回流3 h；滤渣用乙醚回流5 h；滤渣用95 % 乙醇回流5 h，滤渣用18倍量提取3次，2 h/次，提取液浓缩至10 ml，加入乙醇后使溶液中乙醇的浓度约为90% ，静置8 h后抽滤，真空干燥即得千斤拔多糖粗品。结论该实验为千斤拔多糖的提取分离的条件提供了参考，为千斤拔的进一步开发研究提供了依据。 【关键词】 千斤拔 多糖 提取分离工艺 正交设计 　　常见妇科疾病以经前期综合征、阴道炎症、乳腺增生三大疾病最为明显，其中阴道炎症为常见和多发妇科疾病，严重影响患者的生活质量。目前市面上治疗效果和销量较好的妇科千金片对阴道炎症有良好的治疗作用，为女性妇科炎症首选药物。千斤拔为其君药。《中国药典》2005版Ⅰ部中收载千斤拔为豆科植物蔓性千斤拔Moghania philippinensis(Merr. et Rolfe)Li.、大叶千斤拔Moghania macrophylla(Willd.)O.Kuntze或绣毛千斤拔Moghania ferruginea(Wall.ex Benth.)Li.的干燥根［1］，用于治疗风湿痹痛、腰腿痛、风湿关节炎、腰肌劳损、阳痿、遗精、妇科病、乳房疾病等病症［2］。蔓性千斤拔、大叶千斤拔分布较广，主产于江西、福建、台湾、湖北、湖南、广西、广东、四川等省区 ［3］。文献报道千斤拔含有多糖、黄酮、生物碱、β-谷甾醇等多种成分［2］。多糖是一类天然大分子物质, 多糖参与了细胞各种生命活动的调节。大量的药理和临床研究表明植物多糖类化合物是一种免疫调节剂, 它具有激活免疫细胞、改善机体免疫功能等作用［4］。《中国药典》尚未收载千斤拔的质量标准，目前未见有关千斤拔多糖成分的研究报道。本文分别考察了不同提取方法、不同浓度、时间、物料比条件下提取千斤拔多糖的工艺，以期为安全、可控、有效地利用该药材和新药开发研究打下坚实的科学基础。 　　1 材料与仪器 　　UV-752分光光度计(上海第三分析仪器厂)；SHB-3循环多用真空泵（郑州杜甫仪器厂）；旋转蒸发仪（SENCO系列）（上海申生科技有限公司）；hh-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；hctp11b5托盘天平（北京医用天平厂）；正德牌远红外可控调温电炉（成都市聚焱电器厂）；DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。(+)葡萄糖(AR，105 ℃干燥至恒重)；其他试剂均为分析纯。千斤拔药材购于成都药材市场，经刘圆博士鉴定为蔓性千斤拔Moghania philippinensis(Merr. et Rolfe)Li.的根。苯酚试剂［5］: 取苯酚（CP）150 g，加铝片0.2 g和碳酸氢钠1.0 g，蒸馏，收集182 ℃馏份。称取10 g，加水200 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱中备用。 　　2 方法 　　以改良苯酚-硫酸法［5］ 测定千斤拔多糖的含量。 　　2.1 线性关系考察 　　2.1.1 葡萄糖标准溶液的制备精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品70 mg，用水稀释成为700 μg·ml-1的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5 ，1.0，1.5 ，2.0，2.5 ，3.0 ，3.5 ml置50 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，再精密吸取2.0 ml于具塞试管中。各管精密加入4.0 %苯酚溶液［3］1.0 ml，摇匀，迅速分别滴加浓硫酸7.0 ml，摇匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，取出冷至室温后，于490 nm处测定吸光度值。以浓度C(μg·ml-1)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.004 6 C-0.005 8,r =0.999 6 (n=6)。结果表明，在2.86～10.01 μg·ml-1之间，葡萄糖浓度与吸收度值具有良好的线性关系。 　　2.1.2 粗多糖样品溶液的制备精密吸取定容后的粗多糖溶液20 ml置100 ml容量瓶中，稀释至刻度，精密吸取2 ml显色，备用。 　　2.2 精密度（重复性）实验取同一样品（S1）溶液，重复测定吸光度6次，RSD为1.26 %。结果表明方法精密度（重复性）良好。 　　2.3 稳定性实验取样品溶液，每隔0.5 h测定吸光度值，连续4 h，RSD为1.07 %。结果表明样品稳定性良好。 　　2.4 加样回收实验精密称取已知多糖含量的粗多糖溶液1 ml，3份，依次加入不同量的葡萄糖对照品溶液，取“2.1.1”项下的对照品溶液，按“2.