毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响_药学论文.docVIP

毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响_药学论文 毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响_药学论文 【摘要】 目的 研究毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大的影响。方法 采用正交试验设计法考察AngⅡ浓度、心肌细胞密度和AngⅡ干预时间对心肌肥大模型构建的影响，确定心肌肥大模型的构建条件，考查毛茛总苷对AngⅡ诱导的心肌肥大的影响。结果 心肌肥大模型的条件为：AngⅡ浓度为1 μmol·L-1,心肌细胞密度为2×105个·mL-1，AngⅡ干预时间为48 h。50 、100 、200 μg·mL-1毛茛总苷有抑制AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。结论 毛茛总苷有抗心肌肥大的作用。 【关键词】 毛茛总苷；心肌肥厚；血管紧张素Ⅱ；正交试验 　　Abstract:Objective To study effects of angiotensin Ⅱ(concentration of angiotensin Ⅱ, the density of cardiocytes, and optimal time of intervention by angiotensin Ⅱ) on establishment of myocardial hypertrophy model. And effect of ranunculin on angiotensin Ⅱinduced myocardial hypertrophy were studied after myocardial hypertrophy model was established. Results The conditions for myocardial hypertrophy model include concentration of angiotensin Ⅱ：1μmol·L-1, the density of cardiocytes：2×105·mL-1, and optimal time of intervention by angiotensinⅡ： 48 h. 50, 100 μg·mL-1, ranunculin at 200 μg·mL-1 inhibited the process of myocardial hypertrophy induced by angiotensin Ⅱ. Conclusion Ranunculin had the inhibiting effect on myocardial hypertrophy. 　　Key words:ranunculin; myocardial hypertrophy; angiotensin Ⅱ; orthogonal experiment 　　心肌肥厚是高血压病最常见的并发症之一,但其发病机制迄今尚不十分清楚。现已明确,血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ) 、肾上腺素受体激动剂、内皮素及某些细胞因子是导致心肌肥大的重要因子［1］,循环血中和/ 或心肌局部AngⅡ是引起心肌细胞肥大和引起心肌成纤维细胞增殖致心肌纤维化的最重要活性物质［2,3 ］,该作用可被血管紧张素Ⅱ受体亚型1 (AT1) 拮抗剂所阻断。毛茛总苷对AngⅡ所致心肌肥大有无影响,尚未见报道。为此,本实验利用体外细胞培养技术,用血管紧张素Ⅱ构建心肌肥大模型，观察毛茛总苷对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品与试剂 酶标仪（850型,Biotech Laboratories），AngⅡ（Sigma，批号：125K51011），Ⅱ型胶原酶（Invitrogen，批号：DH071），5溴脱氧尿嘧啶（5，Roche，批号:280879），磺基罗丹明B（Sigma批号:3520-42-1）。 　　1.2 实验动物 SD乳鼠（出生1～3 d）,由广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2003-002，粤监证字2005A010。 　　1.3 药物制备 毛茛全草晾干切碎，85％（φ）乙醇回流提取3次，过80目筛,合并提取液，减压浓缩回收溶剂，等体积的醋酸乙酯萃取若干次至醋酸乙酯层为浅绿色。下层（水层）蒸干溶剂，得膏状物经D-101大孔树脂吸附，水洗,弃去,再用纯乙醇洗脱,收集此部位,蒸干乙醇得膏状物即毛茛总苷。毛茛总苷原液配制：取毛茛总苷膏状物用DMEM培养液溶解，配制成5, 10，20 mg·mL-1的原液，无菌过滤，备用。 　　1.4 细胞分离和培养［4］ 用75%（φ）酒精消毒乳鼠，在无菌工作台中取其心脏，放入预冷的D-Hanks液中，剔除心脏周围的肺、大血管及结缔组织,剪碎心脏至沙粒状。加胰酶和胶原酶混合消化，37 ℃，6 min，用小牛血清终止消化，静置片刻，吸去上清。再加