汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段的合成与应用_医学论文.docVIP

汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段的合成与应用_医学论文 汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段的合成与应用_医学论文 【关键词】肾综合征出血热 　　关键词:肾综合征出血热汉坦病毒病毒壳体表位作图肽合成酶联免疫吸附测定 　　摘要:目的以合成肽为抗原建立新型特异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的ELISA.方法用多肽合成仪合成汉坦病毒核衣壳蛋白（aa17-66）50个氨基酸残基的核心序列，以此为抗原，通过实验发现这一序列具有较强的抗原性，首次建立了以合成肽为抗原的新型特异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的ELISA.测定肾综合征出血热（HFRS）患者血清23份，乙型肝炎患者血清9份，正常人血清11份.结果乙型肝炎患者血清和正常人血清均为阴性，20份HFRS血清IgG阳性，21份HFRS血清IgM阳性.本方法的相对敏感性为86%和91%，相对特异性为100%，符合率为93%和95%.结论本法特异性强，灵敏度高，简便易行，是适于基层医疗单位的诊断方法. 　　Keywords:hemorrhagicfeverwithrenalsyndromeHantaan-viruscapsidepitopemappingpeptidesynthe-sisenzyme-linkedimmunostorbentassay 　　Abstract:AIMToestablishanewspecificserologicaldiag-nosticmethodtotestHFRS.METHODSEpitope（aa17-66）ofnucleocapsidproteinwassynthesizedbysolid-phasepep-tidesynthesis.Thenthesyntheticpeptidewasappliedasanantigentotestthespecificantibody（IgG，IgM）byELISA.Twenty-threeserafromHFRSpatients，9fromHBVpatientsand11fromhealthypeopleweredetected.RESULTSAllserafromHBVpatientsandhealthypeoplewerenegative，20fromHFRSpatientsforanti-HVIgGpositiveand21serafromHFRSpatientsforanti-HVIgMpositive.Sensitivityoftheresultswas86%and91%respectivelythespecificitywas100%，andthecoincidenceratewas93%and95%re┐spectively.CONCLUSIONELISAhasbeenestablishedtodetectspeciallytheanti-HVIgMandIgG.Itisasimple，fast，highlyspecificandsensitivemethodsuitableforearlydiagnosisofHFRSinfectedpeople. 　　0引言 　　肾综合征出血热（HFRS）为布尼亚病毒科汉坦病毒属病毒（Hantavirus，HV）引起的自然疫源性传染病，我国是HFRS流行的主要国家［1-3］.HV基因组由L，M，S三个片段构成，分别编码病毒RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2及核衣壳蛋白（简称核蛋白，Nucleocapsidprotein，NP）［4，5］.囊膜糖蛋白上具有中和及血凝抗原位点，可诱导中和抗体和保护性细胞免疫反应核蛋白上虽无中和性抗原位点，但仍可诱导保护性细胞免疫，现有研究表明，在核蛋白上也可能有中和性抗原位点存在［6，7］.血清学研究表明，汉坦病毒核蛋白具有很强的抗原性和免疫原性，患者对核蛋白的抗体不仅出现早，且滴度高［8］.应用单克隆抗体进行的研究表明，抗NP血清或单抗虽然没有中和活性，但用NP免疫的动物仍可产生一定的抗病毒免疫［9-11］.此外还发现抗NP血清或单抗可与多种血清型病毒抗原产生交叉反应，而NP抗原也可与汉坦病毒属内的多种血清型病毒的免疫血清产生交叉反应，表明汉坦病毒NP具有共同的抗原决定簇［12，13］.Vapalahti等［9］应用PERSCAN技术，对连续交错合成的覆盖NP全长的141个14肽进了免疫检测，用兔抗汉坦病毒免疫血清检测后发现了6个多肽抗原线性表位，同时用14份急性期和2份恢复期患者血清进行NP表位抗原检测，发现具有共同反应的抗原表位主要集中在NP氨基酸序列的亲水区.Gott和Elgh等［14，15］分别应用重组DNA技术表达NP的部分片段，并进行免疫学测定和动物实验，表明NP的B细胞表位主要位于NP的氨基端，