溃克灵对溃疡性结肠炎模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群的影响_药学论文.docVIP

溃克灵对溃疡性结肠炎模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群的影响_药学论文 溃克灵对溃疡性结肠炎模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群的影响_药学论文 作者：周红光，陈海彬，徐肇敏，于成功 【摘要】 目的建立溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型，研究溃克灵(KKL)对大鼠UC的治疗作用及对大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ 调节性T细胞的影响，探讨KKL防治UC的作用机理。方法采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)法(100 mg/kg TNBS+50%的乙醇0.25 ml)灌肠复制出UC大鼠模型。将72只大鼠随机分为正常组，模型组，SASP(柳氮磺吡啶)组，KKL大、中、小剂量组;观察结肠大体形态损伤、组织学变化，测定各组大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群百分率的变化。结果与模型组相比，KKL各组、SASP组结肠大体形态损伤、组织学变化显著改善。与正常组比较，模型组大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群降低非常显著(0.01)。而经KKL、SASP治疗3周后，大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ T细胞亚群，均有显著或非常显著性增高(0.01或0.05)。结论 KKL对大鼠UC有显著的治疗作用,提高模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ 调节性T细胞可能是其治疗机制之一。 【关键词】 溃克灵; 溃疡性结肠炎; 中药; CD4+ CD25+ 调节性T细胞 　溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)是一种原因不明的炎症性肠病，以慢性过程、反复发作为其特征，被世界卫生组织列为现代难治病之一。此病病程长，病情复杂，迁延难愈。由于其发病机制不清，目前尚缺乏特异性的治疗措施。溃克灵(KKL)经临床应用，在治疗UC中疗效显著。故笔者结合大量文献、前期实验研究及临床经验，研究其对UC模型大鼠的疗效和对大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+ CD25+ 调节性T细胞的影响，对其作用机理进行了探讨。 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物 采用SPF级Wistar大鼠72只，体质量160~200 g，雌雄各半，由南京中医药大学实验动物中心购自上海斯莱克实验动物责任有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(沪)2003-0003;实验动物使用许可证：SYXK(苏)2002-0123。 　　1.2 药物、试剂及仪器溃克灵由猴头菌、半枝莲、败酱草、马齿苋、白芍、槐花、厚朴、土茯苓等按特定剂量比例组成，为南京市鼓楼医院消化科课题组原创组方，中药制剂购自江阴天江药业有限公司，95℃水浴浓缩，使每毫升含原药材1.28 g。药物制成后，高压灭菌消毒分装，4℃冰箱保存备用。常态宁(柳氮磺吡啶，SASP)：0.25g/片，批号山西三九同达药业有限公司生产。2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)：购于北京邦定泰克生物技术有限公司，由美国sigma公司生产，批号为(2008-16-2)。鼠IL-8酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒购自美国Pierce公司。KQ-250E电动玻璃匀浆机;JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机;55P-7高速冷冻离心机;MDF-U281超低温冰箱等。 　　2 方法 　　2.1 造模方法成年Wistar大鼠72只，适应性喂养1周，观察大鼠进食、饮水、活动、大小便情况，确定大鼠健康后，全部大鼠禁食(不禁水)24h，随机分为造模组(60只),对照组(12只)。用10%水合氯醛腹腔麻醉(0.3 ml/100 g)后，将造模组大鼠固定，将直径2.0 mm长12 cm的输液管经液体石蜡润滑后,由大鼠肛门轻缓插入深约8.0 cm处, 一次性将TNBS/乙醇液(100 mg/kg TNBS+50%的乙醇0.25 ml)用橡胶输液管轻缓注入距大鼠肛门约7~8 cm深的肠腔内留置，将大鼠头向下倾斜45°，放置1 min，然后保持平躺状态自然清醒。对照组12只大鼠予上述方法等量生理盐水灌肠。 　　2.2 药物制备及剂量计算溃克灵成人用药39 g/d，以成人体质量60 kg估算，剂量为0.65 g/kg。参考相关文献，根据人与动物等效剂量换算方法(通过体表面积换算)，大鼠小、中、大剂量按照成人用量的5，10，20倍计算，即3.25，6.5，13 g/kg。1.28 g/ml溃克灵药物用蒸馏水配成325，650，1 300 g/L，大鼠灌胃给药体积为10 ml/kg。SASP：成人用量每天3 g，以成人体质量60 kg估算，成人用量约0.05 g/kg，大鼠取10倍成人用量即0.5 g/kg，药物用蒸馏水配成50 g/L，大鼠灌胃给药体积为10 ml/kg。 　　2.3 分组与给药造模后第3天，将造模组大鼠按性别、体质量分层随机法分为5组