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灰树花子实体多糖中_药学论文 灰树花子实体多糖中_药学论文 作者：陈国广， 孟蕾， 孔毅， 杨婉， 吴梧桐 【关键词】 灰树花；,,多糖,β-葡聚糖；,,,酶 　　摘要：目的探讨灰树花子实体多糖中 β葡聚糖含量的测定方法。方法多糖粗提物依次用高温 α淀粉酶、木瓜蛋白酶和 α1，4葡萄糖水解酶水解，通过测定其中葡萄糖的含量计算β葡聚糖的含量。结果确定了测定方法中几种酶的用量。在0~300 mg#12539;L-1范围内线性关系良好，测得灰树花子实体多糖中 β葡聚糖含量为3.26%~3.51%，3组样品的平均回收率为90.5%。结论该方法操作简便，准确度高。 　　关键词：灰树花； 多糖 β-葡聚糖； 酶 　　Enzymatic Measurement of βglucans in Polysaccharides of Grifola frondosa 　　Abstract：ObjectiveAn enzymatic method for analysis of βglucan in polysaccharides of Grifola frondosa has been studied. MethodsAfter hydrolyzing by thermostable αamylose, papain and amyloglucosidase, the value of glucose were measured and the content of βglucan were computed .ResultsThe dosage of several enzymes were determined and the content of βglucan in the samples were in the range of 3.26%~3.51%. The average recovery was 90.5%. ConclusionThe enzymatic method is simple and with high accuracy. 　　Key words：Grifola frondosa ; Polysaccharide ; βglucans; Enzyme 　　灰树花（Grifola Frondosa）是一种药食兼用的珍贵大型真菌，其子实体中富含氨基酸、多糖以及微量元素等在内的多种营养成分［1］。日本学者通过对灰树花发酵。近20年的研究发现,灰树花中含有的活性多糖具有明显的抗 HIV(艾滋病病毒)、抗肿瘤，改善免疫系统功能及调节血糖、血脂及胆固醇水平、降血压等作用［2,3］，且未发现有毒副作用。研究表明灰树花多糖的免疫活性与其中 β-葡聚糖有密切的关系，因此 β-葡聚糖的含量成为衡量灰树花多糖活性的重要指标之一。本文对灰树花子实体多糖中的 β-葡聚糖的含量的测定方法进行了研究，以期为进一步研究其与灰树花多糖的活性之间的关系奠定基础。 　　1 仪器与试剂 　　1.1 原料 灰树花多糖粗提物，浙江方格药业有限公司。 　　1.2 仪器 HH-2数显恒温水浴锅，Sorvall Super T21冷冻高速离心机，751型紫外分光光度计。 　　1.3 试剂 高温α淀粉酶20 000 U#12539;ml-1，宜兴市生物工程公司，木瓜蛋白酶19.2 U#12539;ml-1，Wrothington公司 ，Amyloglucosidase (α1,4-葡萄糖水解酶)73.8 U#12539;ml-1，Sigma公司。葡萄糖测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司。 　　2 方法与结果 　　2.1 方法 　　2.1.1 高温 α淀粉酶用量的确定准确称取1.0 g灰树花多糖粗提物6份，分别溶于40 ml pH6.0的磷酸缓冲液中，振荡使其溶解，向其中加入一定量的高温α淀粉酶，放入100℃水浴中反应30 min，冷却至室温。离心（8 000 r#12539;min-1, 10 min），取上清液，加入4倍体积的95%乙醇。离心（8 000 r#12539;min-1, 10 min），沉淀用蒸馏水定容至300 ml，即得样品溶液。吸取样品溶液0.1ml，各以水补至1.0 ml，用蒽酮硫酸法于620 nm测吸光度值。结果见图1。由图1可知,当高温 α淀粉酶的用量达到3 000 U#12539;g-1 (多糖粗提物)后,再增加酶的用量，620 nm测得的吸光度值变化不大。因此,确定高温 α淀粉酶的用量为3 000 U#12539;g-1 (多糖粗提物)。 　　图1 高温α淀粉酶的用量对水解效果的影响(略) 　　2.1.2 木瓜蛋白酶用量的确定准确称取1.0 g灰树花多糖粗提物6份，分别溶于40 ml pH 6.0的磷酸缓冲液中，振荡使其溶解，并