瑞香狼毒药材中蛋白质部位的体外活性研究_药学论文.docVIP

瑞香狼毒药材中蛋白质部位的体外活性研究_药学论文 瑞香狼毒药材中蛋白质部位的体外活性研究_药学论文 作者：薄彧坤，周燕，王伟，王玉华 【摘要】 　　目的建立瑞香狼毒药材蛋白质部位体外活性研究的方法。方法琼脂糖扩散法测定总蛋白的抑菌活性；MTT细胞培养法测定总蛋白及分离得到的6个分子量蛋白对肝癌细胞生长的抑制作用及对正常细胞的毒性作用。结果体外活性研究结果表明，总蛋白没有抑菌活性但具有抗肿瘤活性和细胞毒性；分离得到的6个分子量的蛋白中2、3、4、6对肿瘤细胞有抑制作用，1、3、4对正常细胞有毒性作用。结论实验方法可作为瑞香狼毒药材中蛋白质生物活性研究的方法，为瑞香狼毒蛋白质部位的毒性蛋白及活性蛋白的研究提供了方法依据。 【关键词】 瑞香狼毒； 蛋白质； 体外活性 　　Abstract：ObjectiveTo set up the method of detecting in vitro activity of protein site from Stellera chamaejasme L.MethodsThe method of agar diffusion was used antibacterial activity of total protein; MTT cell cultural technique was adopted to measure the cell activity of total protein and the six molecular weight proteins isolated from total protein. ResultsThe study of in vitro activity indicated that the total protein was lack of antibacterial activity but had the function of anti-tumor and the activity of toxicity; the proteins of 2,3,4,6 had the function of anti-tumor and the 1,3,4 have the toxic effect to normal cells.Conclusion In this paper, the method can be used to study the biological ammity of the protein of Stellera chamaejasme L. 　　Key words：Stellera chamaejasme L.； Protein ； In vitro activity 　　瑞香狼毒为瑞香科狼毒属植物瑞香狼毒Stellera chamaejasme L.的干燥根，又名断肠草、红狼毒、火柴头花等［1］，它广泛分布在我国西北、西南、东北及河北等地。瑞香狼毒始载于《神农本草经》，历代本草均有记载；其味苦、辛，性平、有毒，入肺、脾、肝经，功能与主治为逐水祛痰、破积杀虫。瑞香狼毒是蒙医药常用的药材，作为主成分制成的蒙成药多用于治疗乳腺炎和腮腺炎。瑞香狼毒毒性大，经炮制后才入药。误食或过量，会刺激口腔、咽喉，并可见恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头晕头痛、疲乏无力，严重者会出现狂躁和痉挛［2］。瑞香狼毒主要化学成分有香豆素、黄酮、二萜原酸酯、木脂素类化合物、多糖等［3］。近年来的研究显示［4，5］，瑞香狼毒具有抗肿瘤、抗病毒、抗HIV病毒、抑菌、抗癫痫、抗惊厥等作用；瑞香狼毒作为生物杀虫剂使用，原理是利用其药材的毒性作用。瑞香狼毒药材中毒性成分以及活性成分的研究对确定瑞香狼毒的炮制方法，从而确保安全、合理的使用瑞香狼毒药材具有重要意义。本文就蛋白质部分的体外活 性进行了研究。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料 　　瑞香狼毒药材（经内蒙古食品药品检验所康双龙主任药师鉴定）；细胞株（体外培养人肝癌细胞株HepG-2，狗肾细胞株）；MTT（德国simga公司）；RPMl-l640（美国GIBCO公司，批号：60P8244）；胎牛血清（FBS Mdgenics Inc.，批号：CCS0011-100）；青霉素、链霉素（华北制药股份公司）；胰蛋白酶（上海化学试剂厂，批号：82-04-12）；MEM（美国）；二甲基亚砜(DMSO天津汇英化学试剂有限公司)；碳酸氢钠（开原化学试剂厂）。 　 　　1.2 仪器Thenno Fomra型CO2培养箱（池本梨花工业株式会社）；Clympus型倒置显微镜（日本）；DG3022A型酶标仪（国营华东电子管厂）；FA1104型电子天平（上海精科天平）；培养瓶（日本）；3072型96孔板（丹麦）；3001型培养皿（美国）