突触外GABAA受体的δ、α5亚基在大鼠岛叶癫痫模型海马中的表达.docVIP

Ningxia Medical College Thesis for Application of Master Degree Expression of the δ and α5 subunit of the GABAA receptor in the hippocampus induced by the insular epilepsy rats  Student’s Name: Supervisor: Subject Category: Major: Specialty: School: Completion Date:  Wang Enjie Pro. Sun Tao Medicine Surgery Basic and clinical study of Epilepsy Clinical School March 2012 宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本 论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明 的法律结果由本人承担。  论文作者签名＿＿＿＿＿  论文导师签名＿＿＿＿＿  年  月  日  年  月  日  宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机 构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将 本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其 他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。 （保密论文在解密后应遵守此规定）  论文作者签名＿＿＿＿＿  论文导师签名＿＿＿＿＿  年  月  日  年  月  日 宁夏医科大学硕士研究生学位论文  中文摘要  突触外 GABAA 受体的δ、α5 亚基在大鼠岛叶癫痫 模型海马中的表达  摘  要  目的 电刺激 Sprague-Dawley 大鼠岛叶皮质，建立慢性电点燃模型，观察突触外 GABAA 受体的 δ、α5 亚基 RNA 及相关蛋白在海马的表达变化，探讨突触外 GABAA 受 体的 δ、α5 亚基在岛叶癫痫发生发展中的作用。为进一步研究岛叶癫痫的发病机制提供 理论依据。 方法 1. 动物分组: 健康雄性 SD 大鼠 48 只，随机分成 3 组，点燃组、假手术组、 正常对照组，每组 8 只。2.大鼠岛叶慢性电点燃癫痫模型的建立：点燃组、假手术组均 在左侧岛叶颗粒细胞皮质植入双极电极，点燃组先测定大鼠的后放阈，从测定后放阈的 第二天起每日 2 次刺激，刺激时间间隔1h，刺激参数：强度为后放阈 1.5 倍，频率 60 Hz， 波宽 1 ms，持续时间 1 s。假手术组不进行任何刺激。点燃成功后 1 个月给予同样的刺 激参数，观察模型的稳定情况。3.δ、α5 亚基在电刺激大鼠岛叶癫痫模型中的表达：无 痛处死大鼠，取脑组织标本，应用尼氏染色检测大鼠海马各区神经元的数目，应用免疫 组化染色法、实时荧光定量聚合酶链反应研究电点燃大鼠岛叶模型 δ、α5 亚基相关蛋白 和 mRNA 在海马中的表达。 结果 1.电刺激大鼠左侧岛叶颗粒细胞皮质成功建立了慢性电点燃癫痫模型，安静 状态下自由活动的大鼠以及癫痫发作时大鼠岛叶皮层的脑电变化都被记录到，正常大鼠 脑电频率较低，通常在 10Hz 之内，频率低、能量也低，大鼠Ⅴ级发作时的脑电频率增 高到 30Hz，并且能量也大大增强。通过一段时间的点燃，大鼠都可达到Ⅴ级，点燃大鼠 一个月后给予同样的刺激参数均能达到Ⅴ级发作，说明岛叶癫痫动物模型的稳定性良 好。 2．点燃成功后 7d 时，尼氏染色检测表明正常大鼠和癫痫大鼠海马各区神经元数目 I 宁夏医科大学硕士研究生学位论文  中文摘要  的差异无统计学意义（P0.05）。免疫组化染色法检测表明 δ、α5 亚基相关蛋白在海马明 显降低（P0.01）。实时荧光定量 PCR 检测表明 δ、α5 亚基 RNA 在海马明显降低（P0.01）。 结论 δ、α5 亚基可能在岛叶癫痫中起着重要作用；δ、α5 亚基可能参与了岛叶癫痫的 发生、发展过程中。 关键词：岛叶，癫痫，点燃，GABAA 受体，亚基 II 宁夏医科大学硕士研究生学位论文  英文摘要  Expression of the δ and α5 subunit of the GABAA receptor in the hippocampus induced by the insular epil