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色谱常见十四种使用问题的详细解答 问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决? 答：关于漂移问题： ?? 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 ?? 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ?? 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题 ?? 1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 ?? 2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 ?? 3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题? 答：1、柱效要高 ??? 2、热稳定性好 ??? 3、化学惰性强 ???? 具体选择应注意 ?? 1、柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析 ?? 2、柱子内径。内径大小决定柱容量 ?? 3、液膜厚度。分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄 ?? 4、柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长 度 ?? 5、外涂层(柱体)的选择 ?? 6、另外还有仪器型号、分析对象等因素 问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么? 答：1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 ??? 2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏? 答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。 ??? 2、理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定 ??? 3、柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。 ??? 4、噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加. ??? 5、柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层 不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。 问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响? 答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用： ?? 1、提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。 ?? 2、玻璃的惰性不如不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。 ?? 3、易于拆换清洗 ，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基 流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。 ?? 4、可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。从以上几个方面 可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。 问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么? 答：1、进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。 ??? 2、进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。 ??? 3、在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。 ??? 4、系统的进样垫，柱接头等地方漏气。 问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 答：1、样品量不足：解决办法为增加样品量 ??? 2、样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 ??? 3、样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器 ??? 4、检测器衰减太多：调整衰减即可。 ??? 5、检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数 ??? 6、检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。 ??? 7、检测池中有气泡：解决办法为排气。 ??? 8、记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。 ??? 9、流动相流量不合适：调整流速即可。 ??? 10、检测器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决? 答：原因可能有： ??? 1、泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； ??? 2、比例阀失效，更换比例阀即可。 ??? 3、泵密封垫损坏，更换密封垫即可。 ??? 4、溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法； ??? 5、系统检漏，找出漏点，密封即可。 ??? 6、梯度洗脱，这时压力波动是正常的。 问：做PGS／MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱? 答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。为防止这