高中生物《第三章 第二节 月季的花药培养》课件5 （新人教版选修1）.pptVIP

（二）材料的消毒 1、酒精处理 ①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 ②无菌水清洗 ③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 2、消毒液处理 ① 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） ② 无菌水冲洗3~5次 用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 （三）接种和培养 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 1、剥取花药 ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织 注意： 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 2、接种 ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培养 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株 ③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的） 4、鉴定和筛选 5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点： 项目 相同点 不同点 植物组织培养技术 离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。 外植体为体细胞，染色体数无需加倍。 花药培养技术 取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。 种子有果皮包被着，（胚珠有子房壁包被着） 被子植物 裸子植物 种子无果皮包被着，（胚珠无子房壁包被着） 种子 花的结构 被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分。 雌蕊 雄蕊 雌蕊的结构 花粉粒 花粉管 精子 (2个) 卵细胞 极核 （一）、被子植物的花粉发育 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉粒 雄蕊： 一、基础知识 药隔：由薄壁细胞构成，内有维管束 花药 花粉囊（4或2） 囊壁 花粉粒 药隔 药隔 花粉囊 囊壁 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞 ②花粉粒的形成 ①经历时期： 四分体时期、单核期、双核期 四分体时期(小孢子) 有丝 分裂 单核靠边期(小孢子) 单核居中期(小孢子) 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 减数分裂 精子 精子 有丝 分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 生殖细胞 营养细胞 双核期 两个精子和一个营养细胞的基因型相同 1个花粉母细胞 4个小孢子 减分 有分 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有分 8个精子 (二)、产生花粉植株的两条途径 （三）、影响花药培养的因素 1、材料的选择 ①时期－－－初花期 ②选择合适的花粉发育时期是 －－提高诱导成功率的重要因素 只有某一个时期对离体刺激敏感。 最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期 措施？？ 2、培养基的组成 花药培养所采用的培养基因植物的不同而有所变化 3、其他因素 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响 六、实验操作 （一）材料的选取 ②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 ①最常用的方法有醋酸洋红法 1、方法 ①醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色 。 ②醋酸洋红的配置 2、醋酸洋红法 将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。 将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。 ③染色操作 3、焙花青—铬钒法 将无水酒精与冰醋酸按体积比为3 ：1的比例混匀 ①卡诺氏固定液的配制方法 将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。 ②焙花青—铬钒溶液的配制方法 花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。 ③染色操作