高中生物《第二章 第二节 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件6 （新人教版选修1）.pptVIP

专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 两个主要目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌 专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 两个主要目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌 CO（NH2）2 + H2O CO2+2NH3 脲酶 一 研究思路 （一）筛选菌株 耐高温的DNA聚合酶 一 研究思路 （一）筛选菌株 耐高温的DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克 1966年发现水生耐热细 菌Taq 分离到耐高温的Taq DNA聚合酶 一 研究思路 （一）筛选菌株 自然界筛选： 根据它对生存环境的要求，到相应的环境 中去寻找。 一 研究思路 （一）筛选菌株 自然界筛选： 根据它对生存环境的要求，到相应的环境 中去寻找。 实验室筛选： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包 括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止 其他微生物生长。 一 研究思路 （一）筛选菌株 选择培养基： 一 研究思路 （一）筛选菌株 选择培养基： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物 生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生 长的培养基。目的是从众多微生物中分离 所需要的微生物。 一 研究思路 （二）统计菌落数目 1.显微镜直接计数： 先将待测样品制成悬液，然后取一定量的 悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微 镜下观察到的微生物数目来计算出单位体 积内的微生物总数 一 研究思路 （二）统计菌落数目 1.显微镜直接计数： 先将待测样品制成悬液，然后取一定量的 悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微 镜下观察到的微生物数目来计算出单位体 积内的微生物总数 优点： 设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点： 不能区分死菌和活菌。 一 研究思路 （二）统计菌落数目 2.稀释涂布平板计数法: 应用： 统计样品中活菌的数目 原理： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一 个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能 推测出样品中大约含有多少活菌。 注意： 一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。 一 研究思路 （二）统计菌落数目 2.稀释涂布平板计数法: 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置 重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂 布了3个平板，但是，其中1个平板的计数 结果与另2个相差太远，说明在操作过程 中可能出现了错误，因此，不能简单地将 3个平板的计数值用来求平均值。 一 研究思路 （三）设置对照 增强实验的说服力和准确性。 将待测样品经过一系列的稀释，然后选择 三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然 后培养。 注意：为了结果接近真实值，可将同一稀 释度菌液涂布到3个或3个以上的平板上， 经培养，计算出菌落的平均数。 一 研究思路 （三）设置对照 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 对照培养基接种后培养观察菌落数目。 计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 二 实验设计 1. 实验设计的内容包括： 实验方案、材料用具、实施步骤和时间 安排等。 二 实验设计 2. 实验流程： 土壤取样 样品系列稀释 涂布平板与培养 观察并记录结果 菌落计数 二 实验设计 2. 实验流程： （1）土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准 备好的信封中。 （2）样品的稀释 因为不同微生物在土壤中含量不同，其目 的是保证获得菌落数在30～300之间。 不同。 二 实验设计 2. 实验流程： （3）微生物的培养与观察 ①培养皿编号：104、105、106各编号三个 培养皿。 ②每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml。 ③用移液管按照编号分别加入不同浓度土壤稀释 ④冷却倒置