专题基因工程基因工程的基本操作程序(修改).pptVIP

（PCR，polymerase chain reaction ） 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 (检查是否成功) 分子水平检测 个体水平鉴定： ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 DNA分子杂交 DNA分子杂交 抗原-抗体杂交 目的基因的检测与鉴定 1. 检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因 提取受体生 物全部DNA 适当限制 酶切割 DNA片段 与同位素标记的含 目的基因片段基因探针杂交 （表明目的基因已插入） 显出杂交带 提取受体生 物全部DNA 适当限制 酶切割 与同位素标记的含 目的基因片段基因探针杂交 显出杂交带 （表明目的基因已插入） 提取受体生 物全部DNA 适当限制 酶切割 与同位素标记的含 目的基因片段基因探针杂交 显出杂交带 （表明目的基因已插入） 提取受体生 物全部DNA 适当限制 酶切割 与同位素标记的含 目的基因片段基因探针杂交 显出杂交带 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 用同位素标记的 目的基因片段杂交 显出杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 提取受体生物的mRNA ①方法:分 子 杂 交 ②过程: ① 方法：抗原—抗体杂交 3 检测目的基因是否翻译出蛋白质 提取受体生物的蛋白质 与相应抗体杂交 显出杂交带 （表明目的基因已形成蛋白质产品） （二）、鉴定（个体生物学水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ② 过程： 归纳步骤 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 答案：（1）a a （2）基因枪法（花粉管通道法） （3）植物组织培养（1分） 脱分化（去分化） 再分化 （4）耐盐基因（目的基因） 一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中） 1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 练习 2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 3）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 练习 4）有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质