第四章翻译与调控.pptVIP

第四章 翻译与调控 主要内容 mRNA正确翻译的要素 核糖体组成与结构 氨酰tRNA携带正确的氨基酸 密码子与反密码子的识别 翻译的起始、延伸与终止 翻译水平的调控 mRNA稳定性与降解 microRNA对翻译的负调控作用 特异信号应答性翻译水平的调控（如转铁蛋白） 翻译后调控——蛋白质的命运选择 成熟——分子伴侣与蛋白正确折叠、切割、修饰 分选——信号肽与蛋白转运 降解——泛素修饰与蛋白酶体降解 教材《医学分子生物学》第六、七、八章 参考书《基因Ⅷ》第6-8、27章 mRNA翻译的场所——核糖体（Ribosome） 翻译（translation）：以mRNA所携带的遗传信息指导蛋白质合成的过程。 真核生物核糖体的构成 60S大亚基：28S（4718nt）、 5.8S（160nt）、5S（120nt） rRNA+49种蛋白质 40S小亚基：18S（1874nt） rRNA+33种蛋白质 全核糖体80S，由大亚基和 小亚基结合而成 核糖体的结构特点 核糖体提供了mRNA与tRNA相互作用的界面 核糖体相对mRNA移动方向5’→3’（读取密码子） tRNA在核糖体中的移动方向A site →P site →E site（卸载/转移氨基酸到新生肽链） A site：氨酰tRNA位点 （Aminoacyl-tRNA） P site：肽酰tRNA位点 （Peptidyl-tRNA） E site：空载tRNA位点 （Empty tRNA） 氨酰tRNA—空载tRNA循环 空载tRNA加载特异氨基酸由氨酰-tRNA合成酶催化 氨酰tRNA在核糖体中将所携带的氨基酸转移到新生肽链上 氨酰tRNA合成酶对特异性氨基酸和tRNA的识别 tRNA的共性：结构相似，都能够进入核糖体的A位和P位 tRNA的特性：结构细节上的变化区分不同tRNA tRNA的冗余性：一种氨基酸通常对应多个tRNA 携带同种氨基酸的不同tRNA称同工tRNA（isoaccepting tRNA） 共20组同工tRNA 每种氨酰tRNA合成酶识别一 种氨基酸和一组同工tRNA tRNA识别机制 反密码子 接受臂最后三个碱基对 识别子（discriminator）碱基 空间构象…… 每种tRNA具有独特的识别规则 密码子与反密码子的相互识别——摆动假说（wobble hypothesis） 密码子的使用 密码子与反密码子的配对原则——密码子与反密码子配对时前两位的碱基是按常规碱基配对原则配对，而第三位碱基配对发生摆动现象（G-U，I-U/C/A配对） 真核细胞mRNA翻译（蛋白合成）机制 翻译的起始（initiation） 起始密码子AUG，起始子tRNAiMet不同于普通tRNAMet 起始过程需特异起始因子（eIFs）参与 40S小亚基结合mRNA5’端，扫描mRNA直至找到起始点 翻译的延伸（elongation） 延伸过程需特异延伸因子（eEFs）参与 延伸过程氨酰tRNA A site →P site → E site转位，新生肽链P site → A site转位 60S大亚基rRNA提供肽基转移酶活性 翻译的终止（termination） 终止密码子UAA、UAG、UGA 释放因子（eRF）识别A位点终止密码子，解体翻译复合物，释放新生肽链 真核细胞翻译的起始机制 其他翻译起始模式——内部核糖体进入位点起始（某些病毒） 真核细胞翻译的延伸机制 eEF1分为EF1?和EF1??。EF1?（原核生物EF-Tu）装载氨酰tRNA至核糖体A位点；EF1??（原核生物EF-Ts）负责EF1? -氨酰tRNA 再生。 eEF2（原核生物EF-G）驱动核糖体易位（与EF1? -氨酰tRNA竞争结合A位点）。 真核细胞翻译的终止机制 释放因子eRF1（兼有原核RF1和RF2的功能）识别3种终止密码子，由eRF1提供水分子代替氨酰tRNA进行肽转移反应，使翻译终止。 翻译终止需多种因子先后结合A位点 解体后的大小亚基参与新一轮翻译起始，mRNA上同时有多个核糖体进行蛋白合成 mRNA翻译的调控 影响mRNA翻译效率的内在因素 无义突变（提前终止）引发mRNA降解 mRNA半衰期（mRNA稳定性）影响蛋白合成总量 mRNA 5’非翻译区二级结构影响翻译起始效率 起始密码子AUG周边序列（Kozak consensus）影响翻译起始效率 翻译水平的特异性调控 microRNA对靶mRNA翻译的衰减调控（序列特异性） 特异因子应答性翻译水平的调控（转铁蛋白） 蛋白产物对自身mRNA翻译的自主调控 无义突变（提前终止）引发mRNA降解 mRNA的序列和结构决定了稳定性（半衰期） 5’帽子与3’ polyA尾巴稳定mR