分子病理学授课.pptVIP

分子病理技术一、概论二、免疫组化三、原位杂交四、原位PCR（在实验细胞学中讲述） 五、原位末端标记技术 （在细胞凋亡检测方法中讲）六、组织芯片技术（李杨）七、纳米技术（原子力显微镜） 复习题 1 什么是分子病理学？ 常用分子病理技术有哪些？ 2 什么是免疫组织化学？ 试述免疫酶组织化学的方法和原理。 ?一、概论生物高新技术——病理学中的应用向二方面发展： 计算机和图像分析技术的应用简单的形态描述——量化方面发展直接观察——远程远输“间接”观察定量病理学和远程病理学原位杂交、原位PCR和原位末端标记技术分子病理学水平近些年来，尤其是纳米技术的诞生使人们对疾病的认识达原子水平 分子病理学从分子水平研究患病机体生命现象的科学从分子水平研究疾病的发生、发展与转归机制的科学分子生物学细胞生物学 互相渗透、交叉经典病理学分子病理学的形成是分子生物学技术在病理学中的应用的具体体现。 技术手段（1） 分子免疫学+病理学乃至形态科学-—  免疫组织化学（2）分子生物学技术 （探针；PCR；分子杂交）+形态学科 ISH、IS PCR和原位末端标记技术 (3) 生物芯片技术—组织芯片技术 (4) 纳米技术—对疾病的认识达原子水平 研究内容--阐明疾病的病理机理 （1）“大海捞针”式探讨单个致病基因与疾病关系研究—人类基因组计划 （2）信号转导—疾病关系认清疾病发生的信号转导机制最终阐明其机制寻求干预和防治疾病? 病理学发展以方法为先导 人类科学进步的历史和学科的发展——以研究方法与工具创新为先导 一项新技术的创立，随之带来一批新的研究成果 在病理学领域中系统解剖—LM—EM—免疫组化技术器官病理学—细胞病理学—免疫病理学 原位杂交和原位PCR技术的兴起，又将病理学这门有着悠久历史的学科推进到分子病理学水平 21世纪是生命科学的世纪分子生物学是生命科学的带头学科随着生物高新技术在病理学中应用的不断增多，分子病理学将在此研究领域中占有越来越重要的位置 免疫组织化学技术一、概论：概念二、方法和原理三、免疫组织化学方法基本步骤四、免疫组化染色的一般注意事项 一、概论1. 概念：1）免疫组织化学（immunohistochemistry） 是组织学的分支，它是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织原位的显示；是免疫学与组织化学相互渗透、相互交叉而产生的一门学科。2）免疫组化技术 是在组织细胞原位检测抗原（或抗体）的一种方法，也是在蛋白水平原位检测基因表达的一种方法。 2.历史 1914年，Coons等人首次用荧光素标记抗体检测肺炎双球菌的成功，开创了免疫组化的新时代 Sternberger改进并建立了辣根过氧化物酶－抗过氧化物酶（PAP）技术。 80年代以后，ABC、APAAP、LSAB法等，使免疫组化技术的应用更加广泛，成为当今生物医学中形态、功能、代谢等综合研究的一种有力工具。 　　近些年来，由于原位杂交技术、流式细胞仪及图像分析等技术的兴起和应用，使免疫组化引向基因水平和定量检测形成免疫组化新的分支 杂交免疫组化和定量免疫组化。　　90年代初, 原位PCR技术的诞生免疫组化主要是用来原位PCR结果的化学放大和显示，标志着免疫组化技术又进入了一个新的发展阶段。 二、 方法和原理1. 按标记物种类分:免疫荧光法免疫酶法免疫铁蛋白法免疫金法及放射免疫自显影法 2. 按标记物标记的部位分直按法（一步法）间接法（二步法）桥联法（多步法）目前应用最为广泛的为免疫酶法根据三抗、酶的不同又分为PAP法、APAAP法、BA法ABC法、LSAB法和SP法等。 3. 免疫荧光法 已知的抗体或抗原分子标记上荧光素与其相对应的抗原或抗体起反应形成的免疫复合物上带有一定量的荧光素荧光显微镜下——荧光的抗原抗体结合部位检测出抗原或抗体 4. 免疫酶组织化学 60年代初，HRP-抗体分子上，开创了酶标记抗体的新技术，现已广泛应用。目前应用最广泛的酶是HRP，其次是AP。（1） PAP法Ag→Ab1→Ab2→PAP→DAB  其灵敏度是免疫荧光法的100-1000倍（2） ABC法: Ag→ Ab1→ Bio-Ab2→ABC→DAB （3) APAAP法:  Ag→Ab1→