分子生物学实验设计.pptVIP

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2017-08-22 发布于广东
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分子生物学实验设计.ppt

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九、科研设计 1、选题精读5-10本领域最高水平的文章了解国际上该领域的前沿进展找出研究切入点 2、立项依据研究背景、选题依据、提出假设 3、研究内容围绕假设所要进行的研究工作 4、技术路线验证假设所采取的方法和步骤 5、关键技术证明假设必须采用的技术 6、预期成果 RNA提取 5~106 细胞 1ml Trizol 室温， 5min 0.2ml 氯仿剧烈震摇室温2min 12000rpm, 15min 上清加0.5ml异丙醇室温10min 12000rpm, 15min 75%乙醇1ml洗涤 8000rpm 5min 晾干，定量（完整性，含量） 3. RT-PCR RNA 2ug 1ug/ul 2ug 2ul oligdT 0.5ug 0.5ug/ul 0.5ug 1ul 70度 5min ice quickly MLV bf 5X 1X 5ul dNTP 25mM 1mM 1ul RNasin 20Unit/ul 20Unit 1ul MLV 20Unit/ul 20Unit 1ul DepcH2O 14ul 25ul 原始浓度工作浓度体积数 PCR RT产物 2ul bf 10xbf 1xbf 2.5ul Mg2+ 25mM 1.5~2.5mM 2.5ul 上游引物 100pmol/L 100pmol 1ul 下游引物 100pmol/L 100pmol 1ul dNTP 2mM 200umol/L 2.5ul Taq酶 30Unit/ul 10Unit 0.5ul H2O 13ul