乙酸钙不动杆菌TS2H 对DBP 降解特性的研究.docVIP

乙酸钙不动杆菌TS2H对DBP降解特性的研究 段星春1，易筱筠1*，党 志1，陶雪琴2，吴惠勤3，黄晓兰3 1. 华南理工大学环境科学与工程学院，广东 广州 510640；2. 仲恺农业技术学院环境科学与工程系, 广东 广州 510225； 3. 广东省测试分析研究所，广东 广州 510070 邻苯二甲酸酯（PAEs）是一类具有一般毒性和致畸、致突变性的有机化合物，它作为重要的化工原料被大量地用于塑料生产，同时也带来了严重的环境污染问题。以邻苯二甲酸二丁酯（DBP）为PAEs生物降解研究的模型物，通过驯化富集培养，分离出1株能降解DBP的乙酸钙不动杆菌Acinetobacter calcoaceticus）TS2H，研究了TS2H对DBP的生物降解特性。结果表明，该菌可在好氧条件下高效降解DBP，在最佳pH值7时，150 r·min-1 振荡培养48 h对DBP初始浓度为40 mg·L-1的降解率可达到98.64%；TS2H对100 mg·L-1内较高浓度的DBP均具有较高的降解效能，但当DBP浓度达到300 mg·L-1时，降解效能受到一定的抑制；加入营养物蛋白胨能促进菌株TS2H对DBP的降解，而葡萄糖和苯甲酸钠的加入对DBP的降解有延缓作用；菌株TS2H在一定浓度的Zn2+、Cd2+和Cu2+条件下仍可较高效地降解DBP。 邻苯二甲酸二丁酯；微生物降解；乙酸钙不动杆菌属 中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2007）0-0846-04塑料制品的大量使用，造成了土壤、水体及空气中邻苯二甲酸酯PAEs）的严重污染[1,2]。研究表明PAEs的光解、水解速度缓慢[3,4,5]，因此微生物修复技术由于其高效、经济、持久且对环境扰动小而倍受关注[6,7]。邻苯二甲酸二丁酯DBP）作为内分泌干扰物，可扰乱动物及人类的生殖系统和发育，被美国环境保护局列为优先控制污染物。目前，国内外已经就DBP生物降解做了大量的工作，主要包括高效降解菌株的筛选和降解动力学研究、以及酶促降解性和降解途径等方面，但已报道的细菌对于PAEs的生物降解，其降解速率还不能满足实际污染控制的要求，因此仍需筛选更加高效的专性或兼性降解菌。而生物修复的成功运行，主要在于在适宜的环境、营养条件下对污染物具有降解能力的微生物的降解过程能够发生。本文笔者筛选到一株邻苯二甲酸二丁酯（DBP）高效降解菌乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) TS2H，研究了其降解DBP的特性以及环境因子对该菌株降解DBP的影响，以期对DBP的实地生物修复提供依据和实验材料。 DBP购自Sigma公司，纯度为98％，其它试剂均为国产分析纯。有机溶剂重蒸后使用。 无机盐培养基(MSM)：KH2PO4 0.5 g·L-1，K2HPO4 1.5 g·L-1，MgSO.7H2O 0.5 g·L-1，NH4Cl 0.8 g·L-1，CaCl2.2H2O 0.1 g·L-1，FeCl3.6H2O 0.02 g·L-1，调pH为7.2。固体培养基中加入15 g·L-1的琼脂条。 DBP无机盐培养液：以正己烷配制5 g·L-1的DBP溶液，取一定量的DBP溶液，置于灭菌的三角瓶中，待正己烷挥完毕加入灭菌的无机盐基础培养液。 富集培养基(NR)：10 g·L-1L蛋白胨，5 g·L-1牛肉膏，5 g·L-1 NaCl，调pH为7.0，用于菌株的富集。固体培养基中加入15 g·L-1的琼脂条，用于菌株的平板培养和斜面保存。 将分离到的单株菌，先在的含DBP的MSM中培养至对数生长期，然后在富集培养基中培养12～24 h后离心弃上清，用无菌水悬浮备用。取1 mL菌株TS2H的菌液，到40 mL含DBP无机盐培养基中，在培养过程中定时取样，测定微生物的生长量和DBP残留量。同时设不接菌对照，各2个重复，在30，150 r·min-1摇床中避光振荡培养。 1) DBP浓度对菌株TS2H降解：无机盐液体培养基中加入DBP正己烷溶液，使DBP的浓度分别为5、40、100和300 mg·L-1。TS2H在DBP浓度分别为5、40、100和300 mg·L-1无机盐液体培养基中，150 r·min-1 振荡培养40 h。 2) pH值对菌株TS2H降解取1 mL菌液来源同上到20 mL事先用2 mol·L-1 HCl或NaOH调好pH值的含40 mg·L-1 DBP的MSM中，摇瓶培养40 h后，测定微生物的生物量和DBP残留量。 3) 添加葡萄糖、蛋白胨、苯甲酸钠对菌株TS2H降解：分别在20 mL含40 mg·L-1 的无机盐培养基中添加100 mg·L-1的蛋白胨或苯甲酸钠、葡萄糖，然后加入1 mL菌液来源同上，摇瓶培养40 h后，测