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小麦抗感纹枯病品种酶活性比较研究 　 路兴波 (山东省农业科学院植物保护研究所 济南 250100) 　 吴洵耻 周凯南 (山东农业大学植物保护系 泰安 271018) 　 摘 要 本试验选择了4个对纹枯病抗性不同的小麦品种，对它们的过氧化物酶活性、多酚氧化酶活性与抗病性关系进行了研究。结果表明：抗病品种的多酚氧化酶活性高于感病品种的，而过氧化物酶活性无显著差异；人工接种后，各品种的酶活性均增高，但抗病品种的酶活性增加的速度和峰值均大于感病品种。 关键词 小麦纹枯病 过氧化物酶 多酚氧化酶 大量的研究报道表明，小麦品种对纹枯病抗性存在明显差异， 但关于抗性机制的研究报道尚未发现。过氧化物酶和多酚氧化酶在植物抗病中的作用已被广泛研究，但对它们在受侵染植株中的变化特点和与抗性的关系有不同的观点。有人认为寄主植物受到病原物侵染后，在抗病组合中两酶的活性升高得快，比感病组合高出若干倍，由此认为它们参与和决定植物的抗性。而另有人认为感病植物的过氧化物酶活性增加得高且快，故认为它们的增加与抗病性无关，它可能为症状表现的反应[1～9]。关于过氧化物酶同工酶的变化规律也有不同的报道，有报道认为新酶带出现在感病品种上，也有人报道认为新酶带出现在抗病品种上，而更有一些报道认为没有新的酶带出现[3,4,8,10]。 　 　 1 材料和方法 1.1 试验材料 1.1.1 供试品种 选用4个不同抗性品种：昌乐5号、运辐早(高抗品种，病指为4.4和5.0)，济南13(易感病品种，病指为42.5)，鲁麦14(中等感病品种，病指为22.5)。 1.1.2 菌种与取样方法 小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis强致病菌株(泰安)在玉米砂培养基上培养，23℃恒温培养14天，待用。沙培小麦，于幼苗三叶期接种，直接把玉米砂培菌撒在幼苗茎基部保湿，于接种前1天，接种后2天、8天、12天分别取样，供试验用。 1.2 试验方法 1.2.1 过氧化物酶活性测定 称取小麦茎基部鲜重1g，加5mlTris-HCI缓冲液(pH8.5)于研钵中研磨成匀浆，4000pm离心15分钟，倾出上清液，必要时残渣用5ml缓冲液提取一次，合并上清液，贮于低温冰箱(0～5℃)备用。 取光径1cm比色杯2只，于1只中加入上述酶液10μl，再加入反应液3ml(反应液:0.2M磷酸缓冲液(pH6.0)50ml，过氧化氢0.028ml，愈创木酚0.019ml混合而成)立即开启秒表记录时间，于另一比色杯中加入0.2M H3PO4缓冲液(pH6.0)，作为校零对照，在分光光度计上测定反应30秒时在波长470nm下的光密度值。 以每分钟光密度值变化表示酶的活性大小，用以 D 470nm下，1分钟·毫克蛋白(或克·鲜重)表示。 1.2.2 多酚氧化酶(PPO)的活性测定 称小麦茎基部鲜重1g，加蒸馏水少许，于研钵中研细，转移到50ml容量瓶中，混匀。得到的溶液进行振荡，勿使沉淀下沉，吸取10ml悬浮液，倒入250ml滴定瓶中。加入pH6.4的磷酸缓冲液，再加5ml 0.4N的抗坏血酸溶液，混匀，加入5ml 0.2％的邻苯二酚溶液，同时开始计时，并振荡溶液。均匀振荡2分钟，以使空气中氧气充分进入溶液中。精确经过2分钟后，加入5ml5％偏磷酸终止反应(实验在20℃水浴锅中进行)。在有1ml 0.5％淀粉溶液存在下，用0.01N碘酸钾溶液滴定抗坏血酸的剩余物，直到蓝色不消失为止，同时进行对照滴定。 根据所测数据按下式计算多酚氧化酶活性： A＝ ＝ 式中：A为多酚氧化酶活性(1g材料20℃下1分钟氧化抗坏血酸的微克分子数)； 50为分析物悬浮液的总体积； 　 n为分析物样品重量； 10为测定酶活性所取的悬浮液体积(ml)； 2为反应进行时间(分)； 　 a为用于对照滴定的0.01N中KIO3溶液体积(ml)； 　 b为用于样品滴定的0.01NKIO3溶液体积(ml)； 5为0.01N抗坏血酸溶液的毫克换算为微克的系数( ＝5 )。 　 2 结果与分析 2.1 过氧化物酶活性测定 表1 4个品种过氧化物酶活性测定结果(克·鲜重) 　 品种 未接种 接种2天 接种8天 接种12天 昌乐5号 0.57 1.10(93.0％) 1.35(136.8％) 0.94(64.9％) 运辐早 0.63 1.12(77.8％) 1.45(130.2％) 0.95(50.8％) 鲁麦14号 0.58 0.75(29.3％) 1.13(94.8％) 1.05(81.0％) 济南13 0.41 0.55(34.1％) 0.82(100％) 0.77(87.8％) 　 注：（ ）内数值为接种后增加的百分比。 　 根据4个品种不同接种时期过氧化物酶活性测定结果表明：未接种