超速无内毒素质粒大量提取试剂盒.pdfVIP

◆ 超速无内毒素质粒大量提取试剂盒 ◆ 目录号 1217 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 超速无内毒素质粒大量提取试剂盒  试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 10 次 （121701） 20 次 （121702） 溶液P1 室温 50ml 100ml 溶液P2 室温 50 ml 100 ml 溶液N3 室温 50 ml 100 ml 溶液WB 室温 15 ml 30 ml 沉淀液A 室温 18 ml 35 ml 沉淀液B 室温 1.1 ml 2.5 ml 内毒素清除剂 -20℃ 1.5ml 1.5 ml 本试剂盒在室温储存18 个月不影响使用效果。 储存事项： 1. 环境温度低时溶液P2 中SDS 可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热 几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。  产品介绍： 本试剂盒在改良碱裂解法基础上，采用本公司独家研发的溶液配方和内毒素清除 试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA 等杂质，获得高质量的 质粒DNA 。纯化DNA 的OD260/280 通常在 1.8 左右，得到的质粒可直接用于酶切、 转化、PCR 、体外转录、测序等各种分子生物学实验。同时内毒素含量极低，可直接 应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA 纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均 在Eppendorf 管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚氯仿抽提。本产 品是目前市面上最简捷快速的无内毒素质粒大提产品，属于公司独家产品。 - 1 -  操作步骤： 1. 取过夜培养菌140 ml 菌液，装入合适的离心瓶中，12,000 x g 离心3 min 沉淀菌 体，完全弃除上清。 2. 加入5 ml 溶液P1 ，充分混悬震荡菌体沉淀，使其完全分散开，至无絮块存在。 细菌悬液移入50 ml 离心管中。 如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 3. 加入5 ml 溶液P2 ，轻轻颠倒离心管6~8 次，室温放置5 min，使细菌完全裂解， 溶液透明。 温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA 剪切断裂！所用时不应超过5 分 钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠 后就可以做下一步，不是一定要准确的5 分钟。如果未变得清亮，可能由于菌体 过多，裂解不彻底，应减少菌体量。 4. 加5 ml 溶液N3 ，立即颠倒翻转离心管6~8 次，充分混匀，可见白色絮状物产生。 上述混合物于13,000 x g 离心10 min ，小心吸出上清，移入新的50 ml 离心管中。 5. 精确加入上清1/9 体积的沉淀液A （约1.7 ml），颠倒离心管，充分混匀。 沉淀液A 非常粘稠，吸取的时候应该缓慢，精确吸取所需量。 6. 13,000 x g 离心10 min ，小心弃去上清，倒置吸水纸上轻轻沥干残余液体，加入 900μl灭菌水充分吹打底部和侧壁溶解回收质粒DNA ，回收的质粒DNA 全部转 入一个1.5 ml 离心管。 质粒 DNA 由于纯度非常高，几百微克质粒常常附着在管底和管壁无法看见，即 使看不见，也需要充分吹打涮洗离心后理论上的沉淀所在侧管壁和管底。 7. 精确加入沉淀液B 100μl，颠倒离心管，充分混匀。 沉淀液B 非常粘稠，吸取的时候应该缓慢，精确吸取所需量。 - 2 - 8. 13,