一株内生真菌的原生质体制备及再生过程研究.pdfVIP

( ) 第 34 卷 　第 2 期 河南师范大学学报 自然科学版 Vol . 34 　N o. 2 　2006 年 5 月 J ou rnal of H enan N orm al Uni vers i ty ( N at u ral S cience) M ay . 2006 　 　　文章编号 :1000 - 2367 (2006) 02 - 0 106 - 04 一株内生真菌的原生质体制备及再生过程研究 郭丹钊 ,李 　兰 (河南科技学院 生命科技学院 ,河南 新乡 453003) 摘 　要 :通过对酶系组成和酶解条件的研究 ,得出了制备禾本科植物内生真菌 N eoty p hod i um sp . 原生质体的 最佳条件 :鲜菌丝由 10 . 3 %蔗糖溶液预处理 ,酶系组成为 1. 5 % 崩溃酶 、1. 0 % 蜗牛酶 、1. 0 %纤维素酶和 2 . 0 %溶菌 酶 ,酶解温度 32 ℃,p H 6 . 8 ,酶解 5 h ,原生质体得率达 7 . 3 ×103 个/ mg 鲜菌丝. 另外 ,液体再生涂布平板法结合钙 离子作用可使原生质体再生率达 4 . 72 % ,为不含钙离子处理组的2 . 5 倍. 关键词 :原生质体 ; 内生真菌 ; N eoty p hod i um sp . ;制备 ;再生 Q813 . 2 　　　　　　　　　　　　　　　 A 中图分类号 : 文献标识码 : 内生菌以禾本科植物内生真菌最为常见[ 1 ] ,这类内生真菌与其宿主植物有着密切的互利共生关系[2 ] ,但 同时它会提高植物体 内麦角碱类生物碱的含量 ,给畜牧业带来重大的损失[3 ] . 将 内生真菌制备成原生质 体[4 ] ,从而更便捷地进行遗传物质的改造 ,实现共生体品系的改良,是内生菌资源利用的一个重要方向. 本文 对一株禾本科植物内生真菌原生质体的制备与再生过程进行了研究 ,为进一步研究禾本科牧草内生菌共生 体系提供了理论和技术依据. 1 　材料与方法 1 . 1 　材 　料 ( ) 内生真菌 RB - 1 菌株 N eoty p hod i um sp . 由本实验室分离并初步鉴定. ( ) 崩溃酶 SI GMA ,其余试剂购自上海化学试剂公司. ( ) ( ) ( ) 最小成分培养基 MM g/ L : N H SO 1 ;M g SO ·7 H O 0 . 1 ; KH PO 3 ; K H PO 7 ;葡萄糖 5 ; 4 2 4 4 2 2 4 2 4 ( ) 液体再生培养基 :渗透压稳定剂 ST 或 STC 中加入 0 . 5 %酵母膏和 0 . 7 %葡萄糖. 固体再生培养基 : PDA 培养基加 10 . 3 %蔗糖. 双层固体再生培养基 :下层为含 2 %琼脂的固体再生培养基 ,上层为含 1 %琼脂的固体再生培养基. ( )