一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法.pdfVIP

维普资讯 中国水稻科学 (ChineseJ尺c_eSci)，2005，19(6)：561～563 561 httpt{}wwW．ricescience．org 一 种可用于 PCR分析的水稻 DNA简易提取法 陈文岳1，2 包劲松1 周祥胜。 舒庆尧 (浙江大学 原子核农业科学研究所 ，浙江 杭州 310029；浙江省杭州市农业科学研究院，浙江 杭州 310024；。浙江省种子管理站 ，浙江 杭州 310020； 通讯联系人 ：E—mail：qyshu@ziu．edu．cn) A SimplifiedRiceDNA ExtractionProtocolforPCR Analysis CHENWen—yueI·2．BA()Jinsong ，ZHOUXiangsheng ，SHUQing—yao (1InstitHtPofNuclearAgricH，fH，，Sciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China； HangzhouAcademyofAgriculturalSci ences．H “ngzhou310024，China；。ZhejiangSeedAdministrationStation，Hangzhou310020，China； Correspondingauthor，E-mail：qyshu @ H．edu．cn) Abstract：A simpleprotocolwasestablishedforDNA extraction byusing riceetiolatedseedlings．Byusing thismethod， riceDNA wasdirectlyextractedin0．5mol／INaOH solution inaneppendorftube．ResultsofcomparativePCRanalysesand electrophoresisshowed thatDNA extracted by using thismethodwasasgood and usefulasthatisolated by using standard CTAB method． Keywords：DNA extraction；rice；polymerasechainreaction；molecularmarker；simplesequencerepeats；transgene 摘 要 ：以水稻黄化苗为材料 ，用 NaOH溶液抽提 DNA，对其用于基于 PCR技术的 DNA标记 中的效果进行了分析 。 结果发现，用 0．5mol／INaOH对黄化苗进行直接处理 ，并用等量 1mol／ITris—HCI进行稀释 、中和，离心所得的上清液即可 直接用于各种 PCR扩增和随后的DNA标记鉴别。包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析 (琼脂糖 电泳法或毛细 管 电泳法)，用这种方法提取的DNA可 以在短期 内保存 在 PCR分析 中其效果与用常规 CTAB法提取的 DNA相 当 关键词：DNA提取 ；水稻 ；聚合酶链式反应 ；分子标记 ；微卫星标记 ；转基因 中 图分类 号 ：Q94336；S-03；S511．035 文献标 识码 ：A 文 章编 号 ：100卜7216(2005)06—0561-03 DNA分子标记技术在过 去 10年 中得 到 了飞速 发展 ，显 1．2 DNA提取 示出其在农作物育种、种质资源指纹分析和种子纯度鉴定等 上述供试材料种子在 28～3O℃下浸种 、催芽并暗培养 6 领域的 良好应用前景…1。其 中各种基于 PCR技术的 DNA d，待黄化苗长到 2～3cm 时 ，剪下备用 。本实验采用 的简易 分子标记 ，由于所需的DNA量较少 ，对质量 的要求较低 ，因 提取法 步骤如下 ：