去唾液酸糖蛋白受体单链抗体靶向蜂毒肽的体外抑瘤效应研究.pdfVIP

医药导报２００６年７月第２５卷第７期 ·６３９· ·疫苗及分子生物药物专栏 · 去唾液酸糖蛋白受体单链抗体 靶向蜂毒肽的体外抑瘤效应研究 １ １ １ １ １ １ １ ２ ２ １ 曹利民 ，赵晓蓉 ，叶　庆 ，雷　萍 ，吴　砂 ，代　维 ，朱慧芬 ，朱荫昌 ，司　进 ，沈关心 （１．华中科技大学同济医学院免疫学系，武汉　４３００３０；２．江苏省寄生虫病防治研究所，无锡　２１４０６４） ［摘　要］　目的　探讨抗去唾液酸糖蛋白受体（ＡＳＧＰＲ）单链抗体Ｃ１与蜂毒肽（Ｍｅｌｉｔｔｉｎ）重组蛋白Ｃ１Ｍ靶向抑制 ２＋ 肝癌细胞的效果。方法　将含Ｃ１Ｍ／ｐＧＣ的ＸＬ１Ｂｌｕｅ转化菌通过 ＩＰＴＧ诱导表达。表达产物用Ｎｉ螯合柱亲和纯化， 免疫组织化学技术分析重组蛋白Ｃ１Ｍ的抗原结合能力，四氮唑盐（ＭＴＴ）法检测Ｃ１Ｍ对肝癌细胞株 ＨｅｐＧ 的增殖抑制 ２ 作用。结果　原核表达质粒Ｃ１Ｍ／ｐＧＣ在ＸＬ１Ｂｌｕｅ中获得有效表达；表达产物以可溶性形式存在；纯化的Ｃ１Ｍ相对分 ３ 子量为２９．４×１０；免疫组化结果表明Ｃ１Ｍ能有效识别去唾液酸糖蛋白受体，与ＨｅｐＧ（Ｃ１Ｍ）共培养３ｄ，细胞生长抑制 ２ 率达９２．０％。结论　在大肠埃希菌中成功表达Ｃ１Ｍ，位于Ｃ端的Ｍｅｌｉｔｔｉｎ蜂毒肽能有效抑制肿瘤细胞的生长，为体内研 究Ｍｅｌｉｔｔｉｎ的靶向抗肝癌效果奠定了基础。 ［关键词］　蜂毒肽；重组免疫毒素；单链抗体；肝癌细胞 ［中图分类号］　 Ｒ９６６　　　［文献标识码］　Ａ　　　［文章编号］　１００４０７８１（２００６）０７０６３９０３ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡｎｔｉＡＳＧＰＲＳｃＦｖＴａｒｇｅｔｉｎｇＭｅｌｉｔｔｉｎａｎｄＩｔｓＡｎｔｉｔｕｍｏｒ ＥｆｆｉｃａｃｙｉｎＶｉｔｒｏ １ １ １ １ １ ２ ＣＡＯＬｉｍｉｎ，ＺＨＡＯＸｉａｏｒｏｎｇ，ＹＥＱｉｎｇ，ＬＥＩＰｉｎｇ，ＷＵＳｈａ，ＤＡＩＷｅｉ，ＺＨＵＨｕｉｆｅｎ，ＺＨＵＹｉｎｃｈａｎｇ，ＳＩ ２ １ Ｊｉｎ，ＳＨＥＮＧｕａｎｘｉｎ（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉａｎｇｓｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰａｒａｓｉｔｉｃＤｉｓｅａｓｅｓ，Ｗｕｘｉ２１４０６４，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｃｙｔｏｌｙｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｏｎｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｐＧｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎＣ１Ｍ ２ ｆｏｒｍｅｄｂｙＭｅｌｉｔｔｉｎｆｕｓｉｎｇｔｏａｎａｎｔｉＡＳＧＰＲｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎＦｖａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃ１）．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＡｓｉｎｇｌｅｃｏｌｏｎｙｏｆＥ．ｃｏｌｉＸＬ１Ｂｌｕｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｐＧＣＣ１ＭｗａｓｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｉｎＬＢｂｒｏｔｈ，ｔｈｅｎｄｉｌｕｔｅｄ１／１００ｉｎｔｏ１０００ｍＬＬＢ