应用琼脂扩散法测定饲料中木聚糖酶含量的研究.pdfVIP

2009年增刊 学术研究 应用琼脂扩散法测定饲料中木聚糖酶含量研究 汤海鸥 (北京挑战生物技术有限公司， 中国北京， 100081) 摘要l本试验研究了应用琼脂扩散法测定饲料中所含木聚糖酶的活性．结果表明，谈方法标准曲线制作线性良好； 应用淀粉稀释木聚糖酶进行验证性试验，检测酶活值和实际理论值之闻差异不显著(Po．OS)，说明镶方法准确率很高；应 用饲料稀释未聚糖酶进行验证性试验，检测酶活值略低于理论值，但这并不影响谊方法对饲料中酶活的判定．综合整个 试验结果表明，此方法可以很好的检测饲料中含有的微量木聚糖酶． 关键词I琼脂扩散法：木聚糖酶；酶活力；检测 近年来，酶制剂在饲料行业的应用越来越广 泛，其中聚糖酶由于可分解饲料中较人比例含 取1．59琼脂粉加入其中，加热溶解，入培养皿。 有的抗营养网子一聚糖酶，而逐渐成为植酸 每个15mL，冷后放入30℃箱约5h除去表面 酶之后，成为饲料中最常用的酶制剂。 聚糖酶 冷凝水。 检测．力．法目前普遍应用DNS显色法，可方便快速 1．3．2标准曲线的制作。称取对照聚糖酶样 检测纯的聚糖酶含量，但用于检测饲料中酶活 2．04509，用磷酸氢二钠一酸缓冲液分别稀释 时，由于饲料本身含有还原糖，干DNS显色， 因此不能用来准确检测饲料中的 聚糖酶。粘度 和100x56倍，用微量取液器分别取不I一浓度酶液 法(M．R．Bedford等，2004)、酶联吸附法(呼和等， 1001aL，点样于放在琼脂平板上的牛杯内。然后 2005)也可用来检测饲料中含有的聚糖酶酶将点好样的平板放入37℃的恒温培养箱中反应 活，但粘度法存在准确性不高，酶联吸附法操作 18h，用7mL0．2％的果红染色30min，用水 1M 复杂、成本高，均很难在国内饲料业中推广使 洗去染色剂，再用7mLNaCl脱色至见清透 用。本文 了一种可以测定饲料中微量聚糖 明 ，应用游标卡测量反应所形成的透明 直 酶的新方法——琼脂扩散法，该方法是在 径。每个样品做平行2个平板，每个平板放有2 个牛杯，每个样品测量值取4个牛杯的平均 Dingle(1950)提出的Cup-plate法基础上，冉结合抗 值。最后以透明的直径为 标， 聚糖酶活 生索的微生物检定法(中华人民共和国药，2000) 变而来。在传统的琼脂扩散法基础上，结合 力的对数值为 标作图，制得标准曲线。 聚糖酶的理化性质进行适当改进，试验研究表明， l-3．3样品的检测。称取各种样品饲料29，加入 本方法可用于测定饲料中含有的聚糖酶。且操 50ml 酸缓冲液， 力搅 pH5．5磷酸氢二钠一 作简便，需要仪器较少，测量成本低，很适合在 实际饲料生产中推广应用。 lOOpL点样，其余操作同标准曲线的制作。18h后， l材料与方法 测定酶解。根据标准曲线换算出样品含酶量(曲 1．1材料对照聚糖酶样品(由北京挑生物线每次需同步制作)。 1．3．4琼脂扩散法准确性检验 技术有限公司提供，酶活为11187U／g)；肉鸡全价 饲料(中国农业科学院试验基地养鸡厂提供)。 1-3．4．1饲料加酶检验。称取4份10009的未加酶 1．2试荆与仪器 聚糖(Sigma)，琼脂粉， 粉状饲料，采用逐级混合的方式分别添