妊娠奶牛PAPPA和PAGmRNA表达规律的研究.pdfVIP

中国牛业科学 2011，37(3)：I-5 ChinaCattleScience 科学试验 妊娠奶牛PAPPA和 PAGmRNA表达规律的研究 郭 宁，李 莲，周 璇，崔群维，王根林 (南京农业大学动物科技学院，江苏 南京 210095) 摘 要：[目的]分析PAPPA(妊娠相关血浆蛋 白A)和 PAG(妊娠相关糖蛋 白)mRNA在不 同妊娠时期奶牛外周血的表达规律。[方法]提取奶牛空怀期和妊娠 30d、60d、90d、150d 和 240d血浆中游离RNA，RT-PCR扩增 PAPPA 和PAG的基 因，分析其在妊娠期的相对 表达水平，并研究其表达规律 。[结果]PAG基因在空怀组和妊娠牛均有表达，在牛妊娠 240d时相对表达水平达到高峰；PAPPA从妊娠 30d时表达水平开始升高，并在妊娠 150d 时达到最高水平。[结论]本研究为深入探讨奶牛PAPPA和 PAG基因调控规律和早期妊 娠诊 断提供 了参考。 关键词 ：奶牛；PAPPA；PAG；基 因表达 中图分类号 ：S814．1 文献标识码 {A 文章编号 ：1001—9111(2011)03—0001-05 妊娠相关血浆 蛋 白 A (pregnancy—associated 达规律 ，从而为奶牛早期妊娠诊断提供参考。 plasmaprotein—A，PAPPA)是 1974年 Lin-1等首次 1 材料与方法 从孕妇血清中分离出来的一种大分子糖蛋 白质，它 在血清中的含量与妊娠周期密切相关 。有研究发 1．1 试验材料 现，妊娠期 PAPPA 由胎盘滋养合体细胞和蜕膜细 1．1．1 试验动物 试验动物来 自于扬州大学实验 胞分泌合成并进入血循环[2]，而 PAPPA虽在其他 农场无繁殖障碍 的 48头荷斯坦母牛，将其分为 6 组织也有微量表达 ，但水平远低于胎盘 。目前 ，在人 组 ，分别为对照组 (健康未经产青年奶牛和经产半年 医上 PAPPA 已被作为孕妇血清学产前检查 的一项 内未配种的奶牛)8头 ，试验组妊娠 30d、60d、90d、 重要生化指标 ，主要用于妊娠早期诊断 。近年来大 150d和 240d母牛各 8头 。 量的研究发现，母体外周血 中PAPPA异常低值与 1．1．2 主要试剂与仪器 柱式病毒 RNAout(北京 胎儿染色体数 目和结构异常相关 ，是 目前妊娠早期 天恩泽基因科技有限公司)、反转录酶 (TAKARA)、 最常用、最有希望的临床筛查指标之一。 琼脂 、SYBRGreenMaster(Roche)、7300型荧光定 妊娠相关糖蛋 白(pregnancy-associatedglyco— 量 PCR仪 (ABI)、紫外分光光度计。 protein，PAG)是一种 由胎盘分泌的妊娠特异性蛋 1．2 试验方法 白，已经在牛、绵羊、猪等 [3动物 中发现 。PAG已经 1．2．1 样品采集 10mL离心管在 0．1 DEPC水 被认为在妊娠过程 中起着免疫保护作用，一些研究 中经过夜处理 、干燥 、高压等步骤彻底清除外源污染 还表 明PAG在妊娠期浓度不断增加与牛的免疫抑 的RNA。尾静脉采集奶牛血液，柠檬酸钠抗凝剂与 制有关[4]。在妊娠奶牛 中，PAPPA和 PAG都可 以 血液 以1：6的比例进行抗凝处理。 作为一种妊娠标记蛋 白，且其在妊娠期均有着重要 1．2．2 引物合成 以看家基 因l3一actin为内参 ，从 的作用 。本试验通过分析 PAPPA和 PAG 的mR— GenBank中检索牛 PAPPA和 PAG 的 mRNA序 NA在妊娠奶牛外周血 中的相对表达量 ，研究其表 列，使用PrimerPremier5．0软件设