应用real-timeRT-PCR鉴定两个水稻品种(品系)对水稻条纹病毒的抗性差异.pdfVIP

应用real-time RT-PCR 鉴定两个水稻品种（品系）对 水稻条纹病毒的抗性差异* 杨金广，方振兴，张孟倩，徐飞，王文婷，谢荔岩，林奇英，吴祖建，谢联辉 福建省植物病毒学重点实验室，福建农林大学植物病毒研究所，福州（350002 ） E-mail: jinguangyang@126.com 摘 要：本研究应用real-time RT-PCR 检测了水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV ）在2 种 水稻品种（品系）武育粳3 号和KT95-418 的悬浮细胞内复制循环和相对含量的差异，结合 传统生物学接种实验，确定了这两个品种（品系）对RSV 抗性的差异。结果表明RSV 在武 育粳3 号的悬浮细胞内24 h 达到复制高峰，病毒含量为侵染初期的7.46 倍。而在KT95-418 的悬浮细胞内，RSV 达到复制高峰需要36 h ，病毒含量为侵染初期的4.51 倍。利用病毒生 物学接种的方法，武育粳3 号发病率达91.7% ，而KT95-418 仅为36.0%。由此可见，KT95-418 较武育粳3 号对RSV 具有较高的抗病性。因此，real-time RT-PCR 方法与传统生物学接种实 验方法相比，具有更高的准确性和灵敏性，可以作为传统品种抗病性鉴定的验证手段。 关键词：水稻，水稻条纹病毒，品种抗性，real-time RT-PCR ，悬浮细胞 中图分类号：S435.111.49 水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV ）是由灰飞虱（Laodelphax striatellus ）以持久方式 传播的植物病毒[1] [2] ，该病毒引起的水稻条纹叶枯病是我国温带和亚热带稻区的主要病害 。 从 1999 年以来，该病害在江苏，安徽，浙江，河南，山东，辽宁，云南，北京和上海等地 流行暴发，给当地稻米生产造成巨大损失，引起社会的广泛关注[3] 。其中，感病品种的大面 积栽培造成该病害大规模暴发流行的主要因素之一。因此，筛选和培育抗病品种是解决该病 害危害最为经济有效的措施。当前，在品种抗病性筛选中，多采用田间小区实验和实验室的 病毒生物学接种实验，这些方法均费时费力，并且因传播介体灰飞虱传毒效率的差异，易造 成实验结果较大的误差。笔者所在实验室已筛选出两个水稻品种（品系）武育粳 3 号和 KT95-418 对 RSV 的抗性存在显著差异。其中KT95-418 是从武育粳 3 号高发病田间筛选出 的单株抗病植株，推测可能为武育粳 3 号感病品种变异而来的抗病新品系。田间小区实验和 实验室传统生物学接种实验均显示 KT95-418 较武育粳 3 号对 RSV 具有较高的抗病性。为 进一步验证该结果，本研究通过 real-time RT-PCR 检测 RSV 在这两个水稻品种（品系）悬 浮细胞内复制情况的变化，来确定两者的抗性差异，以期能够提供一个更加准确，快速和灵 敏的品种抗性鉴定的新方法。 1．材料与方法 1.1 供试植物材料和病毒毒源 水稻品种武育粳 3 号和水稻新品系 KT95-418 为本实验室保存。 实验毒源分别采自江苏洪泽(HZ)和云南楚雄(CX)水稻田间呈典型水稻条纹叶枯病症状 的病株，经RT-PCR 鉴定后，保存于水稻植株上（台中 1 号）。发病病株用于RSV 病毒提纯 [4] 。RSV 经高效传毒灰飞虱传毒于 2 叶期水稻幼苗，并在 28℃，14 h 光照和 10 h 黑暗，防 虫条件下培养，10 d 后，观察待试植株症状发生，30 d 后，统计发病结果。以发病率表示 *本课题得到国家重点基础研究规划项目（973 ） （2006CB100203 ）; 教育部博士点专项科研基金 (20040389002; 20050389006); 国家自然科学基金的资助。 -1- 其抗病性的差异，其差异显著性通过卡方 X2 进行分析。 1.2 水稻悬浮细胞培养与 RSV侵染