应用多重PCR技术快速检测抗虫转基因水稻.pdfVIP

第35卷第6期 中国测试 Vo1．35 No．6 2009年 l1月 CHINA MEASUREMENT ＆ IEST November，2009 应用多重 PCR技术快速检测抗虫转基因水稻 王渭霞，赖凤香，洪利英，傅 强 (中国水稻研究所 ，浙江 杭州 310006) 摘 要：通过优化PCR扩增体系中缓冲液的浓度、退火温度、引物的组合及其浓度等参数，建立了转基因水稻及其 加工品中几种外源基因成分的多重PCR检测体系。利用该体系检测 CaMV35S、NOS、CrylAc或Cry]Ab的三重 PCR 条件为：缓冲液工作浓度2．0x、引物各为 0．2 M、退火温度为58℃，循环数为 35个。缓冲液工作浓度为 1．5x，其他条 件不变，可进行 CaMV35S、NOS、Bt和 死的四重 PCR检测。缓冲液工作浓度为 1．o)【，其他条件不变 ，可进行 CaMV35S、NOS、Bt和hpt的四重PCR检测。该多重 PCR检测体系具有特异性好、简便、快速、准确等优点，能够有效 地检测出转基因水稻质量百分比含量 (w／w)O．1％的转基因成分。 关键词 ：多重 PCR；转基因抗虫水稻；基因 中图分类号 ：TS37：S435．111．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1674—5124(2009)06—0097—05 Application ofmultiplex polymerase chain reaction to rapidly detectinsect—-resistanttransgenicrice WANGWei—xia，LAIFeng-xiang，HONGLi-ying，FUQiang (ChinaNationalRiceResearchInsitute，Hangzhou310006，China) Abstract：Through optimizingthe concen~ation ofmediate liquid，annealing temperature，primers，etc．，multiplex polymerasechain reaction PCR)mehtod wasdesignedforsimultaneously detecting CaMV35S promoter，NOs terminator， ‘(hygromycinBphosphotransferasegene)，inesct-resistantegeneCrylAc，Cry]Ab，cp死 whichis frequently uesd in transgenie rice．The resultshow thathte high efficiency PCR system was obtained when hte primeris0．2 M ofreach，andnanea]ing temperature is58℃ ．，rIlefinalconcentration ofPCR bu ris2．o)【for detection of CaMv35s．Nos，Bt；htefinal concentration ofPCR bufferis 1．sxofrdetection ofCaMv35s，Nos， Btand C T／；hte final concentration ofPCR buff er is 1．o)【fordetection of fV35S， ⅣDs，Btand hvt．And tlle limits of detection are 0．1％ ． ，I1Iis method was stabh， reliable， rapid and accurate ofr testing different trna sgenlc rice． ． Key words：MultiplexPCR；lnsect-resisitanttransgenicrice；Gene