鸵鸟白细胞抗菌肽的分离纯化和部分性质研究.pdfVIP

中国家禽业——机遇与挑战 鸵鸟白细胞抗菌肽的分离纯化及部分性质研究。 齐珂珂1一，康相涛1，扩，陈丽颖1，韩瑞丽1，李国喜1，孙桂荣1，田亚东1 (1．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所， 450002) 北京100094；3．河南家禽种质资源创新研究工程中心，河南郑州 FF弱酸性阳 摘要：本研究使用氯化铵裂解、超声波破碎、醋酸提取、CM-sepharose 离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法，从鸵鸟白细胞中分离纯化出了 抗茵肽，使用微量琼脂糖弥散法进行了抗茵活性与最小抑茵浓度(MIC)的测定，应用二 级质谱(MS／MS)对抗茵肽的分子量和氨基酸序列进行了测定。结果表明：在鸵鸟白细 胞中存在抗菌肽，其对金黄色葡萄球茵Sn“心“s1056MRSA、鸡大肠杆茵E∞zi078和 白色念珠茵C口z6im咒sATCCl0231具有较强的抑制作用；抗菌肽具有阳离子性质；热稳 o．065灶g／ml，峰16的分子量为4012．472Da，对鸡大肠杆菌和金黄色葡萄球茵的MIC分 542．479 Da，对鸡大肠杆茵争金黄 别为3．971弘g／ml和5．245肛g／nll，峰24的分子量为3 色葡萄球菌的MIC分别为26．472pg／ml和21．561弘g／ml。 关键词：鸵鸟；白细胞；抗茵肽；纯化 antibiotics)，是广泛存 抗菌肽又称抗微生物肽(antimicrobialpeptide)或肽抗生素(peptide 在于动物、植物和微生物中的一大群结构和化学性质各异、具有抗微生物活性的蛋白质和多肽的统 称，是机体天然免疫防御系统的一部分。迄今为止，科学家们在昆虫、被囊动物、两栖动物、鸟 类、鱼类、哺乳动物、植物乃至人类等多种生物体中发现并分离获得了800余种内源性抗菌肽[1]。 抗菌肽属无毒副作用、无残留、无致细菌耐药性的环保型物质，具有广谱抗菌特性，除能非特异性 地抗细菌、真菌、病毒等病原体外，还有抗肿瘤细胞的作用。可应用生物工程的技术方法生产抗病 菌的转基因动植物产品，同时可以通过基因工程的技术方法大量的表达抗菌肽，使之成为新一代肽 类抗菌药的来源，具有出广阔的应用前景。 鸵鸟适应环境能力强，能在45℃的高温和一35℃的低温环境下生长、繁殖。其抗病力极强， 除3．月龄以下的幼鸟会因营养不良造成死亡外，其他极少病亡，到目前为止，尚未发现传染病造成 鸵鸟大批死亡的报告。其伤口愈合能力、抗病力明显强于其他动物[2’3]。据此推测，在长期的进化 过程中，鸵鸟体内可能形成了优于其他动物抵御外界病原菌的物质。 关于鸵鸟抗菌肽的研究国内尚无报道，基于抗菌肽的重要生理功能及其在实际生产实际中良好 的应用前景，本试验开展了对鸵鸟白细胞中抗茵肽的分离纯化及性质研究工作。 (2006BDA01AD9)I河南省杰出人才创新基金(074200510009)． 作者简介。齐珂珂(198l～)，女，河南偃师人，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所在读博士生，研究方向为营养与肉品 cIl。 质，手机E-曲ajl：kergh2006@yah∞．∞n 263．mt。 662 第五篇禽病防治。 1材料与方法 1．1试验动物 12月龄成年非洲鸵鸟，来自于河南省金鹭鸵鸟园，两公三母。 1．2试验茵种 鸡大肠杆菌E．∞Zi 078株由河南农业大学牧医工程学院微生物教研室提供，金黄色葡萄球菌 S．口“愆“s1056MRSA和白色念珠菌C口Z6ic彻sATCCl0231购自中国兽医药品监察所。 1．3主要试剂