人参皂甙Rg1、Rb1对体外培养膝软骨细胞凋亡作用的研究.pdfVIP

·120· 2009年河南省中医中西医结合骨伤科学术年会暨学习班资料汇编 人参皂甙Rgl、Rbl对体外培养膝软骨细胞 凋亡作用研究 吕振超1，曹向阳1，郭艳幸2 (1．河南省正骨研究院，河南洛阳471002； 2．福建省厦门市第二医院，福建厦门361021) 提要目的：观察人参皂甙Rgl、Rbl对体外培养软骨细胞对IL—l诱导软骨细胞凋亡的影响，并比较其对细 胞影响的差异性。方法：成功培养出软骨细胞后，进行人参皂甙影响细胞代谢浓度筛选，设人参皂甙Rgl不同 为干预细胞凋亡浓度组，设立人参皂甙R91、I强l组和对照组，IL—l诱导软骨细胞凋亡，流式细胞仪检测其凋亡 数量和比例，透射电镜检测细胞凋亡形态和亚微结构。结果：人参皂甙Rglm、Rblm组对软骨细胞调亡有明显 的抑制作用，在抑制软骨细胞过度凋亡没有明显差异。结论：人参皂甙Rgl、Rbl能明显抑制软骨细胞过度的调 亡，抑制膝骨性关节炎的发生、发展，为进一步在体实验提供理论基础。 关键词人参皂甙Rgl、Rbl软骨细胞凋亡 随着社会人口老龄化的进程，骨性关节炎的发病 中，37℃、5％C02培养箱内培养。每周换液2—3次， 率日渐增高，膝骨关节炎已成为危害人们生活质量的 接近融合时用0．05％胰蛋白酶一0．02％EDTA消化 主要疾病之一。目前对本病的治疗大都以对症治疗 3min，以l：3或l：4传代o 为主，对本病确切的病因病理认识还不够确定，远期 1．4人参皂甙R91、Rbl对软骨细胞代谢作用浓度 疗效不够确定，探索本病的病因病理及寻求有效的治 筛选 疗方法成为必需。本研究通过体外培养膝软骨细胞 1．4．1人参皂甙Rgl、Rbl浓度筛选设立人参皂 的方法来观察人参皂甙Rgl、Rbl对软骨细胞代谢和 凋亡的影响，探索对软骨修复和对膝骨性关节炎防治 作用。 1材料与方法 组；空白组。MIT法检测细胞代谢作用，取第一、四、 l。1实验动物四周龄颏西兰白兔。 七天进行检测，筛选出合适浓度组。 1．2 1．5人参皂甙R91、Rbl对软骨细胞凋亡的影响 主要试剂及仪器设备DMEM培养液(GIB— CO)，胎牛血清(GIBCO)，胰蛋白酶咖(SIGA)，Ⅱ型1．5．1实验分组量效组将IL一1分为1斗g／L组、 胶原酶(SIGA)，人参皂甙Rgl、Rbl(上海市药品检验100,g／L组、1001a,g／L组和空白组。 鉴定所)，Annexin—V—FITC调亡检测试剂盒(浙江时效组根据IL—l量效结果，选取合适浓度作为 联科)，倒置相差显微镜(OLYMPUS)，流式细胞仪(美实验浓度，加入人参皂甙Rglm(50p．mol／L)和人参皂 国)，透射电镜(日本)，超净工作台(美国)，二氧化碳 孵箱(日本)，离心机(上海)。 测细胞调亡结果。 1．3软骨细胞的分离、培养无菌条件下切取四周 1．5．2检测步骤IL一1诱导软骨细胞凋亡的量效 龄新西兰白兔膝关节全层软骨片，移入超净工作台， 反应：细胞按每孔106个种植于6孔板，培养24小时 切成0．5～lmm3碎粒，胰蛋白酶消化30—45rain后，后，吸取原培养基，分别加入IL—l00e,／L、1∥L、 再加入5倍容积的0．2％II型胶原酶消化4—6h，离 测。 心机离心去除原液，加入培养基，移人100ram培养皿 2009年河南省中医十西医结旨骨伤科学术年会暨学日班资料汇编 12 细胞孺亡时效反应：细胞按每孔106个种植于6义(p(0 IL 孔板，培养24小时后，吸取培养基，加^含lOpg／L义(P(005)．说明适当浓度人参皂甙R91、Rbl抑 一1的培养基．12h、2Ah检测其