鹅细小病毒NS基因PCR和单抗竞争ELISA检测方法的建立及应用.pdf

摘要 ． 摘要 鹅细小病毒病(Goose parvovirusinfection)又称小鹅瘟(Goslingplague，GP)或Derzsy’S 病，主要侵害4日龄至20日龄雏鹅和雏番鸭，可以引起急性肠炎及肝、肾、心等实质脏器败 血性病变，尤其以小肠部位的纤维性、栓塞性病变为主要特征。由于该病病程短、传播快、 死亡率高，造成了严重的经济损失，是目前危害养鹅业健康发展的重要传染病之一。由于该 病每年均有不同程度的流行，长期困扰着养鹅业的健康发展，所以需要一种准确、简便的诊 断方法来对该病作出准确诊断。 引物，以GPV-98E株鹅胚尿囊液的核酸提取物为模板，经优化反应条件，建立了检澳iJGPV的特 异性PCR方法。敏感性试验结果显示，该方法对GPV核酸的最小检出量为4．194pg，尿囊液的 小相符的476bp的特异性片段，而对作为对照的鸭肠炎病毒(DEV)、禽流感病毒(AIV)、鹅副粘 病毒(GPMV)的核酸均未扩增出任何条带。并将其应用于临床检测，对52份临床感染的雏鹅的 心、肝、肠等组织进行PCR扩增，能够检测到相应的特异性病毒核酸片段，表明建立的鹅细 小病毒PCR检测方法具有敏感性高、特异性强的特点，具有潜在的临床应用价值。 本研究用超离纯化的鹅细小病毒98E株免疫6周龄BALB／e雌性小鼠，免疫3次后取其 脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，经4击 次亚克隆，最终获得4株分泌抗GPV抗体的阳性杂交瘤细胞株，分别命名为1G3、2GS、388 及间接免疫荧光显示，4株单抗均能与天然GPV结合。阻断结果表明，1G3和3Bll能被小 鹅瘟阳性血清阻断。 本实验选用初步纯化fVP2．VLPs(杆状病毒系统表达的重组VP2病毒样粒子)作为包被 抗原，GPV 并对其进行优化，确定最佳反应条件。并对鹅细小病毒病毒样粒子免疫后的抗体水平进行监 测，为鹅细小病毒病的快速诊断、疫情监测、流行病学调查和免疫抗体效价测定提供物质基 础和技术支持。 关键词鹅细小病毒；PCR：单克隆抗体；竞争ELISA；应用 Abstract and ofNSGene DevelopmentApplication PCRandaMonoclonalBased Antibody ELISAtoDetect ’Competitive Goose ParvovirusInfection Abstract Goose infectionalso or infects Derzsys parvovirus known弱Goslingplague disease．mainly and can to domestic cause andalso 20-day—old goslingsMuscovyduckings．It 4-day-old chordapsus andother the fibrousofthesmallintestine． organs liver,kidney,heart