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遗传 HEREDITAS(Beijing)11(4):36-3旦鱼夕丝 DNA顺序测定中缺失子大小的快速鉴定 高家国 汪训明 （复旦大学遗传学研究所，上海） 本文介绍了一种DNA顺序测定中缺失子大小的快速鉴定的方法。基本步骤是：用细胞裂解液裂 解被 M13缺失子感染的细胞，离心取．上清直接电泳鉴定缺失子的 RFDNA 的相对大小，从而推侧缺 失的大小。 关锐词：’DNA顺序，缺失子，快速鉴定 DNA顺序测定技术在分子遗传学中占有 （二）缺失子大小的鉴定 用牙签挑取 重要的地位，近十年来得到不断发展和完善。 以方法 一（）得到的转化噬菌斑置于2mlLB培 目前，DNA顺序分析法主要是 Maxam和 养液中，加人20川培养过夜的大肠 杆菌 Gilbert13，的化学断裂法及 Sanger[”的双脱氧 JM101,37℃振荡培养过夜。培养液用台式高 链终止法。由于Messingt4l的单链噬菌体载体 速离心机 型（号：TGL-16G，上海医用分析仪 的建立，使双脱氧链终止法简便易掌握，越来越 器厂）15,000rpm离心15分钟，上清40C保存， 受到青睐。 离下的菌体用50川细胞裂解液 1（%0oSDS20.05M 由于电泳系统分辨率的限制，目前一次顺 Tris-HCl，pH6.8，0.002MEDTA,0.4,M蔗糖， 序分析反应只能测定300个左右核营酸对，因 0.1务嗅酚蓝）37℃裂解 15分钟后，，立即用台 此要测定大片段 DNA分子的顺序，先要做亚 式高速离心机离心15分钟，吸取上清液于 克隆分段测定，利用顺序的重叠得出整个DNA 17cm长、0.7务无EB的琼脂糖凝胶上以2V/ 的顺序。 Hong[.，建立的M13载体的非随机 cm电泳 18小时，0.5z1g/mlEB液中染色45 DNA系统测定法，是以靠近引物处为定点，在 分钟，在紫外灯下拍照记录结果。 插人片段内定向产生大大小小的缺失，然后选 （三）缺失子的顺序分析 根据方法 二（） 择一系列缺失子 （缺失从小到大）来测定整个插 的电泳结果，从保存的上清液中提取单链 人片段的DNA顺序。由于缺失的大小是随机 DNA，按 Sangerts1双脱氧法进行 DNA顺序 的，缺失子大小的快速鉴定方法的建立，将会为 分析。 寻找系列缺失子提供方便，从而大大地提高顺 结 果 与 讨 论 序测定的效率。本文总结了我们几年来的工作 经验，介绍一种DNA顺序测定中缺失子大小 图1示16个随机克隆的快速鉴定。缺矢 的快速鉴定法。 子 a（-p)的迁移率随机分布在重组克隆 q（） 和载体 M（13mp8)(r）之间，表明缺失的大小 材 料 与 方 法 一（）带有油菜叶绿体 16SrRNA基因 GaoJiaguoetal.:AMethodforRapidIdentifi- cationoftheSize of the Delelants in DNA (1.5kb）的重组噬菌体的定向缺失 按Hong Sequencing 的方法进行[1]0 本文于 1988年7月20日收到。 图 1 童组噬菌体的定向随机缺失 a-P:缺失克隆；9:重组克隆；r:M13mpS, 图2示油菜16SrRNA荃因重组噬困体的系列缺失子 图3 图2中b,。、d缺失于的顺序分析 a：重组克隆；b-h：系列缺失子：isM13mp8, 是%RflioE*X定油菜 16SrRNA基因（1.5kb) 测定出油菜16SrRNA基因的顺序。 图3表 重组子的顺序过程中，利用细胞裂解电泳法